ISO 20636:2018
(Main)Infant formula and adult nutritionals — Determination of vitamin D by liquid chromatography-mass spectrometry
Infant formula and adult nutritionals — Determination of vitamin D by liquid chromatography-mass spectrometry
This document specifies a method for the quantitative determination of vitamin D2 and/or vitamin D3 in infant formula, and adult nutritionals in solid (i.e. powders) or liquid (i.e. ready-to-feed liquids and liquid concentrates) forms using liquid chromatography-mass spectrometry. The application range runs from 0,15 µg/100 g (limit of quantification) to 59 µg/100 g for vitamin D2 and from 0,25 µg/100 g to 65 µg/100 g for vitamin D3.
Formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes — Détermination de la teneur en vitamine D par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse
Le présent document spécifie une méthode destinée à la détermination quantitative de la vitamine D2 et/ou de la vitamine D3 dans les formules infantiles et les produits nutritionnels pour adultes sous forme solide (à savoir les poudres) ou sous forme liquide (à savoir les liquides prêts à l'emploi et les liquides concentrés) par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. La plage d'application s'étend de 0,15 µg/100 g (limite de quantification) à 59 µg/100 g pour la vitamine D2, et de 0,25 µg/100 g à 65 µg/100 g pour la vitamine D3.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20636
First edition
2018-07
Infant formula and adult
nutritionals — Determination of
vitamin D by liquid chromatography-
mass spectrometry
Formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes —
Détermination de la teneur en vitamine D par chromatographie
liquide couplée à la spectrométrie de masse
Reference number
©
ISO 2018
© ISO 2018
All rights reserved. Unless otherwise specified, or required in the context of its implementation, no part of this publication may
be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2018 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents and materials . 2
5.1 General . 2
5.2 Reagent preparation. 2
5.3 Standard preparation . 3
5.4 Calibration standard solutions . 4
6 Apparatus . 4
7 Sample preparation . 5
7.1 Powder sample preparation . 5
7.2 Slurry sample preparation . 5
7.3 Liquid sample preparation . 5
8 Procedure. 6
8.1 Extraction and derivatisation . 6
8.2 Chromatography . 6
8.3 Mass spectrometry . 7
9 Calculations. 8
10 Results .12
11 Precision .12
11.1 General .12
11.2 Repeatability .12
11.3 Reproducibility .13
Annex A (informative) Examples of spectra and chromatograms.15
Annex B (informative) Precision data .18
Annex C (informative) Alternative instrument settings .20
Annex D (informative) Comparison between ISO 20636 and EN 12821 .21
Bibliography .23
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, in collaboration
with AOAC INTERNATIONAL. It is being published by ISO and separately by AOAC INTERNATIONAL.
The method described in this document is equivalent to the AOAC Official Method 2016.05, Analysis
of Vitamin D and Vitamin D in Fortified Milk Powders, Infant Formulas, and Adult/Pediatric Nutritional
2 3
Formulas.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2018 – All rights reserved
INTERNATIONAL STANDARD ISO 20636:2018(E)
Infant formula and adult nutritionals — Determination of
vitamin D by liquid chromatography-mass spectrometry
WARNING — The use of this method can involve hazardous materials, operations and equipment.
This method does not purport to address all the safety problems associated with its use. It is the
responsibility of the user of this method to establish appropriate safety and health practices.
1 Scope
This document specifies a method for the quantitative determination of vitamin D and/or vitamin D
2 3
in infant formula, and adult nutritionals in solid (i.e. powders) or liquid (i.e. ready-to-feed liquids and
liquid concentrates) forms using liquid chromatography-mass spectrometry. The application range
runs from 0,15 µg/100 g (limit of quantification) to 59 µg/100 g for vitamin D and from 0,25 µg/100 g
to 65 µg/100 g for vitamin D .
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1
adult nutritional
nutritionally complete, specially formulated food, consumed in liquid form, which may constitute the
sole source of nourishment, made from any combination of milk, soy, rice, whey, hydrolysed protein,
starch and amino acids, with and without intact protein
3.2
infant formula
breast-milk substitute specially manufactured to satisfy, by itself, the nutritional requirements of
infants during the first months of life up to the introduction of appropriate complementary feeding
[SOURCE: CODEX STAN 72-1981]
4 Principle
Samples are saponified at high temperature then lipid soluble components are extracted into isooctane.
A portion of the isooctane layer is transferred, washed, and an aliquot of 4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-
dione (PTAD) is added to derivatise vitamin D to form a high molecular mass, easily ionisable adduct.
The vitamin D-adduct is then re extracted into a small volume of acetonitrile and analysed by reversed-
phase liquid chromatography. Detection is by mass spectrometry using multiple reaction monitoring
(MRM). Stable isotope labelled d6-vitamin D and d6-vitamin D internal standards are used for
2 3
quantitation to correct for losses in extraction and any variation in derivatisation and ionisation
[2]
efficiencies .
5 Reagents and materials
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and
distilled or demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 General
5.1.1 Standards, ≥99 % pure.
5.1.2 Vitamin D , ergocalciferol.
5.1.3 Vitamin D , cholecalciferol.
5.1.4 d6-Vitamin D , 26,26,26,27,27,27-d6 ergocalciferol.
5.1.5 d6-Vitamin D , 26,26,26,27,27,27-d6 cholecalciferol.
5.1.6 PTAD (4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione).
5.1.7 Formic acid (HCO H), LC-MS grade.
5.1.8 Potassium hydroxide (KOH).
5.1.9 Pyrogallol (C H (OH) ).
6 3 3
5.1.10 Ethanol (C H OH).
2 5
5.1.11 Methanol (CH OH), LC-MS grade.
5.1.12 Isooctane ((CH ) CCH CH(CH ) ).
3 3 2 3 2
5.1.13 Acetone (CH COCH ).
3 3
5.1.14 Acetonitrile (CH CN), LC-MS grade.
5.2 Reagent preparation
5.2.1 PTAD solution, c(4-phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione) = 10 mg/ml. Dissolve 50 mg PTAD (5.1.6)
in 5,0 ml acetone (5.1.13).
5.2.2 Potassium hydroxide solution, c(KOH) = 8,9 mol/l. Dissolve 100 g potassium hydroxide (5.1.8)
in 200 ml water.
5.2.3 Ethanolic pyrogallol solution, c(C H (OH) ) = 0,079 mol/l. Dissolve 5 g pyrogallol (5.1.9) in
6 3 3
500 ml ethanol (5.1.10).
5.2.4 Mobile phase A, c(HCO H) = 0,026 5 mol/l. To 500 ml of water, add 0,5 ml formic acid (5.1.7).
5.2.5 Mobile phase B, methanol, 500 ml (5.1.11).
2 © ISO 2018 – All rights reserved
5.3 Standard preparation
5.3.1 Vitamin D is sensitive to light. Perform all steps under low-level incandescent lighting. If exclusively
vitamin D is required for analysis, then standards pertaining to vitamin D need not be used and vice
3 2
versa. Calibration standards should be bracketed at the beginning and at the end of an analytical run.
5.3.2 Vitamin D stable isotope labelled stock standard solution, ρ ≈ 10 μg/ml. Dispense the
contents of a 1 mg vial of d6-vitamin D (5.1.4) into a 100 ml volumetric flask. Dissolve in 90 ml of ethanol
(5.1.10). To promote dissolution, sonicate if necessary. Mix thoroughly, make up to volume with ethanol
(5.1.10). Measure the absorbance of an aliquot at 265 nm. The spectrophotometer should be zeroed
against an eth
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 20636
Première édition
2018-07
Formules infantiles et produits
nutritionnels pour adultes —
Détermination de la teneur en vitamine
D par chromatographie liquide couplée
à la spectrométrie de masse
Infant formula and adult nutritionals — Determination of vitamin D
by liquid chromatography-mass spectrometry
Numéro de référence
©
ISO 2018
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2018
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2018 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs et matériaux . 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Préparation du réactif . 2
5.3 Préparation de l’étalon . 3
5.4 Solutions d’étalonnage . 4
6 Appareillage . 5
7 Préparation des échantillons . 6
7.1 Préparation des échantillons de poudre . 6
7.2 Préparation des échantillons de suspension . 6
7.3 Préparation des échantillons de liquide . 6
8 Mode opératoire. 6
8.1 Extraction et dérivatisation . 6
8.2 Chromatographie . 7
8.3 Spectrométrie de masse . 7
9 Calculs . 9
10 Résultats .13
11 Fidélité .13
11.1 Généralités .13
11.2 Répétabilité .13
11.3 Reproductibilité .14
Annex A (informative) Exemples de spectres et chromatogrammes .16
Annex B (informative) Données de fidélité .19
Annex C (informative) Autres paramètres d’instrument .21
Annex D (informative) Comparaison entre l’ISO 20636 et l’EN 12821 .22
Bibliographie .24
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le Comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
en collaboration avec l’AOAC INTERNATIONAL. Il est publié par l’ISO et séparément par l’AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans le présent document est équivalente à la Méthode officielle
de l’AOAC 2016.05, Analysis of Vitamin D and Vitamin D in Fortified Milk Powders, Infant Formulas, and
2 3
Adult/Pediatric Nutritional Formulas.
Il convient d’adresser les commentaires ou questions portant sur le présent document à l’organisme
national de normalisation de l’utilisateur. Un référencement complet de ces organismes est disponible à
l’adresse www .iso .org/members .html.
iv © ISO 2018 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE ISO 20636:2018(F)
Formules infantiles et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en vitamine D par
chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de
masse
AVERTISSEMENT — L’utilisation de la présente méthode peut impliquer des matériaux, des
opérations et des équipements dangereux. La présente méthode n’a pas pour but de traiter
les problèmes de sécurité qui peuvent être liés à son utilisation. Il est de la responsabilité de
l’utilisateur de la présente méthode de mettre en place des pratiques appropriées en matière de
santé et de sécurité.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode destinée à la détermination quantitative de la vitamine D
et/ou de la vitamine D dans les formules infantiles et les produits nutritionnels pour adultes sous
forme solide (à savoir les poudres) ou sous forme liquide (à savoir les liquides prêts à l’emploi et les
liquides concentrés) par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. La plage
d’application s’étend de 0,15 µg/100 g (limite de quantification) à 59 µg/100 g pour la vitamine D , et de
0,25 µg/100 g à 65 µg/100 g pour la vitamine D .
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/
3.1
produit nutritionnel pour adultes
aliment complet sur le plan nutritionnel, spécialement formulé, consommé sous forme liquide, pouvant
constituer la seule source d’alimentation, composé de n’importe quelle combinaison de lait, soja, riz,
lactosérum, protéine hydrolysée, amidon et acides aminés, avec et sans protéine intacte
3.2
formule infantile
substitut du lait maternel spécialement fabriqué pour satisfaire, par lui-même, les besoins nutritionnels
des nourrissons pendant les premiers mois de la vie jusqu’à l’introduction d’une alimentation
complémentaire appropriée
[SOURCE: NORME CODEX 72-1981]
4 Principe
Des échantillons sont saponifiés à haute température, puis les composants lipidiques solubles sont
extraits dans de l’isooctane. Une partie de la couche d’isooctane est transférée et lavée, puis une
aliquote de 4-phényl-1,2,4-triazoline-3,5-dione (PTAD) est ajoutée pour dérivatiser la vitamine D
afin de former un adduit facilement ionisable de masse moléculaire élevée. L’adduit de vitamine D est
ensuite de nouveau extrait dans un petit volume d’acétonitrile et analysé par chromatographie liquide
en phase inverse. La détection est réalisée par spectrométrie de masse en mode MRM (multiple reaction
monitoring). Des étalons internes de vitamine D -d6 et de vitamine D -d6 marquées par un isotope
2 3
stable sont utilisés pour la quantification afin de corriger les pertes d’extraction et toute variation
[2]
d’efficacité dans la dérivatisation et l’ionisation .
5 Réactifs et matériaux
Au cours de l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de pureté équivalente.
5.1 Généralités
5.1.1 Étalons, de pureté ≥ 99 %.
5.1.2 Vitamine D , ergocalciférol.
5.1.3 Vitamine D , cholécalciférol.
5.1.4 Vitamine D -d6, ergocalciférol 26,26,26,27,27,27-d6.
5.1.5 Vitamine D -d6, cholécalciférol 26,26,26,27,27,27-d6.
5.1.6 PTAD (4-phényl-1,2,4-triazoline-3,5-dione).
5.1.7 Acide formique (HCO H), de qualité CL-SM.
5.1.8 Hydroxyde de potassium (KOH).
5.1.9 Pyrogallol (C H (OH) ).
6 3 3
5.1.10 Éthanol (C H OH).
2 5
5.1.11 Méthanol (CH OH), de qualité CL-SM.
5.1.12 Isooctane ((CH ) CCH CH(CH ) ).
3 3 2 3 2
5.1.13 Acétone (CH COCH ).
3 3
5.1.14 Acétonitrile (CH CN), de qualité CL-SM.
5.2 Préparation du réactif
5.2.1 Solution de PTAD, c(4-phényl-1,2,4-triazoline-3,5-dione) = 10 mg/ml. Dissoudre 50 mg de PTAD
(5.1.6) dans 5,0 ml d’acétone (5.1.13).
2 © ISO 2018 – Tous droits réservés
5.2.2 Solution d’hydroxyde de potassium, c(KOH) = 8,9 mol/l. Dissoudre 100 g d
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.