ISO 15163:2012
(Main)Milk and milk products — Calf rennet and adult bovine rennet — Determination by chromatography of chymosin and bovine pepsin contents
Milk and milk products — Calf rennet and adult bovine rennet — Determination by chromatography of chymosin and bovine pepsin contents
ISO 15163:2012 specifies a reference method for the determination of the amounts of chymosin and bovine pepsin present in a test sample of calf rennet and adult bovine rennet. In addition, it can be used for mixtures of calf/bovine rennet with fermentation-produced bovine chymosin (FPC).
Lait et produits laitiers — Présure de veau et coagulant issu de bovin adulte — Détermination des teneurs en chymosine et en pepsine bovine par chromatographie
L'ISO 15163|FIL 110:2012 spécifie une méthode de référence pour la détermination des quantités de chymosine et de pepsine bovines présentes dans un échantillon pour essai de présure de veau et de coagulant issu de bovin adulte. De plus, elle peut être utilisée pour des mélanges de présure de veau/coagulant d'origine bovine contenant de la chymosine bovine produite par fermentation (FPC).
General Information
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15163
IDF
First edition
2012-05-15
Milk and milk products — Calf rennet and
adult bovine rennet — Determination by
chromatography of chymosin and bovine
pepsin contents
Lait et produits laitiers — Présure de veau et coagulant issu de bovin
adulte — Détermination des teneurs en chymosine et en pepsine
bovine par chromatographie
Reference numbers
IDF 110:2012(E)
©
ISO and IDF 2012
IDF 110:2012(E)
© ISO and IDF 2012
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective
address below.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Silver Building Boulevard Auguste Reyers 70/B B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.org E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Published in Switzerland
ii © ISO and IDF 2012 – All rights reserved
IDF 110:2012(E)
Contents Page
Foreword . iv
Foreword . v
Introduction . vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Principle . 1
4 Reagents . 2
5 Apparatus . 3
6 Sampling . 4
7 Procedure . 4
7.1 Check . 4
7.2 Preparation of a fresh column with Fractogel . 4
7.3 Regeneration and equilibration of the Fractogel resin in the column . 4
7.4 Storage of the column with Fractogel . 5
7.5 Preparation of test sample . 5
7.6 Analysis of the desalted rennet . 6
7.7 Determination of the clotting times . 7
8 Calculation and expression of results . 8
8.1 Calculation of the activity of chymosin and pepsin, expressed as a percentage . 8
8.2 Calculation of active chymosin and active bovine pepsin, in milligrams per litre . 9
8.3 Expression of results . 10
9 Precision . 10
9.1 Interlaboratory test . 10
9.2 Repeatability . 10
9.3 Reproducibility . 11
10 Test report . 11
Annex A (informative) Qualitative determination by double immunodiffusion of milk-coagulating
enzymes in commercial coagulants . 12
Annex B (informative) Interlaboratory test . 17
Bibliography . 19
IDF 110:2012(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 15163IDF 110 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by IDF and
ISO.
This first edition of ISO 15163IDF 110 cancels and replaces IDF 110B:1997, which has been technically
revised.
iv © ISO and IDF 2012 – All rights reserved
IDF 110:2012(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit organization representing the dairy sector worldwide.
IDF membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy
associations having signed a formal agreement on cooperation with IDF. All members of IDF have the right to
be represented on the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
The main task of Standing Committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the Standing Committees are circulated to the National Committees for endorsement prior to
publication as an International Standard. Publication as an International Standard requires approval by at least
50 % of IDF National Committees casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 15163IDF 110 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical Committee
ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published jointly by IDF
and ISO.
All work was carried out by an ISO-IDF Project Group on Chymosin and bovine pepsin determination, of the
Standing Committee on Analytical methods for processing aids and indicators, under the aegis of its project
leader, Prof. A. Andrén (SE).
This first edition of ISO 15163IDF 110 cancels and replaces IDF 110B:1997, which has been technically
revised.
IDF 110:2012(E)
Introduction
Calf rennet and adult bovine rennet preparations contain both chymosin and bovine pepsin in various amounts
as main clotting enzymes. The proportion of chymosin decreases relative to pepsin in the abomasum (the
fourth “true” stomach) with age and at weaning of the calf.
The ratio of abomasa from young cattle to that of old cattle in the raw material for rennet production thus
highly influences the composition of chymosin and pepsin in the final rennet. The higher the abomasa from
[5][6]
young milk-fed calves, the higher the proportion of chymosin and vice versa .
Both chymosin and pepsin have special characteristics relevant to milk-clotting activity and suitability for
cheese making. The milk-clotting activity of pepsin is, for example, much more pH-dependent than chymosin
and pepsin also has a more general proteolytic activity than chymosin.
Therefore, it is very important to analyse the content of chymosin and pepsin in addition to the strength (total
[6][7]
milk-clotting activity) of the rennet .
vi © ISO and IDF 2012 – All rights reserved
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 110:2012(E)
Milk and milk products — Calf rennet and adult bovine rennet —
Determination by chromatography of chymosin and bovine
pepsin contents
1 Scope
This International Standard specifies a reference method for the determination of the amounts of chymosin
and bovine pepsin present in a test sample of calf rennet and adult bovine rennet. In addition, it can be used
for mixtures of calf/bovine rennet with fermentation-produced bovine chymosin (FPC).
2 Normative references
The following referenced document is indispensable for the application of this document. For dated references,
only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced document (including
any amendments) applies.
ISO 11815IDF 157:2007, Milk — Determination of total milk-clotting activity of bovine rennets
3 Principle
As a first step, the rennet sample is desalted and the enzymes chymosin and bovine pepsin separated on an
[8][9]
anion exchange column . In a second step, the milk-clotting activity of each of the separated two enzymes
is determined by ISO 11815IDF 157 (reconstituted milk with pH 6,5). The enzymatic composition of the
rennet sample is expressed in percentage chymosin activity and percentage pepsin activity of the sum of the
activities in International Milk-Clotting Units (IMCU) of both components, or the results are expressed in
milligrams per litre of active chymosin and milligrams per litre of active pepsin.
The total milk-clotting activity of the first batch of calf rennet reference standard powder and the first batch of
adult bovine rennet reference standard powder has once and for all been set at 1 000 IMCU/g. Future
preparations of reference standards shall be set relative to the previous reference standards (see
ISO 11815IDF 157).
This International Standard specifies both a manual set-up of the anion exchange chromatography and an
alternative automated set-up.
This is a reference method and changes may therefore only be made if confirmed to give the same result, and
repeatability and reproducibility at least as high as the original standard method. Any change to what is stated
in this International Standard method shall also be mentioned in the test report (see Clause 10).
IDF 110:2012(E)
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized
water or water of equivalent purity.
® 1) ®
4.1 Resin, Fractogel EMD DEAE (M) (Merck cat. no. 1.16883) or Mono Q 1 ml prepacked column
2)
(HR 5/5 or 5/50 GL from GE Healthcare) or equivalent resin.
® ®
NOTE 1 Fractogel EMD DEAE (M) is a suitable resin for manual chromatography and Mono Q is suitable for the
automated chromatography. ®
NOTE 2 If the Fractogel or Mono Q resins are substituted by another resin, it will most likely be necessary to change
the buffers in 4.12, resulting in a need to re-evaluate the method.
4.2 Piperazine hexahydrate (C H N6H O).
4 10 2 2
4.3 Sodium chloride (NaCl).
4.4 Thymol, optional preservative.
4.5 Sodium hydroxide (NaOH).
4.6 Hydrochloric acid solution, c(HCl) 1 mol/l.
4.7 Ethanol (C H OH), with a volume fraction of at least 96 %.
2 5
4.8 Ethanol (C H OH), with an approximate volume fraction of at least 20 %.
2 5
Add 105 ml ethanol 96 % (4.7) to 400 ml water and mix. If a sterile filtration is desired, filter the water before
mixing it with the ethanol.
4.9 Urea, c(N H CO) 8 mol/l.
2 4
Dissolve 48 g urea in water and fill to a total volume of 100 ml.
3)
4.10 Dialysis tubing, of diameter approximately 1 cm (Union Carbide) or equivalent (optional).
NOTE The quality of the dialysis tubing is not critical.
4)
4.11 Desalting columns, Bio-Rad – Econopac 10DG (cat. no. 732-2010) or equivalent (optional).
Use either the dialysis tubing (4.10) or the desalting columns for desalting the rennet.
4.12 Buffer solutions
4.12.1 Buffer solution I, piperazine [(CH ) (NH) ], c[(CH ) (NH) ] = 0,025 mol/l.
2 4 2 2 4 2 ®
1) Fractogel EMD DEA
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 15163
FIL
Première édition
2012-05-15
Version corrigée
2012-08-01
Lait et produits laitiers — Présure de
veau et coagulant issu de bovin adulte —
Détermination des teneurs en chymosine
et en pepsine bovine par
chromatographie
Milk and milk products — Calf rennet and adult bovine rennet —
Determination by chromatography of chymosin and bovine pepsin
contents
Numéros de référence
FIL 110:2012(F)
©
ISO et FIL 2012
FIL 110:2012(F)
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO et FIL 2012
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
soit de l'ISO soit de la FIL, à l'une ou l'autre des adresses ci-après.
ISO copyright office Fédération Internationale du Lait
Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Silver Building Boulevard Auguste Reyers 70/B B-1030 Bruxelles
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.org E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Publié en Suisse
ii © ISO et FIL 2012 – Tous droits réservés
FIL 110:2012(F)
Sommaire Page
Avant-propos . iv
Avant-propos . v
Introduction . vi
1 Domaine d'application . 1
2 Références normatives . 1
3 Principe . 1
4 Réactifs . 2
5 Appareillage . 3
6 Échantillonnage . 4
7 Mode opératoire . 4
7.1 Contrôle . 4
7.2 Préparation d'une nouvelle colonne de Fractogel . 4
7.3 Régénération et équilibrage de la résine Fractogel dans la colonne . 5
7.4 Stockage de la colonne de Fractogel . 5
7.5 Préparation de l'échantillon pour essai . 5
7.6 Analyse du coagulant d'origine bovine dessalé . 6
7.7 Détermination des temps de coagulation . 8
8 Calcul et expression des résultats . 9
8.1 Calcul de l'activité de la chymosine et de la pepsine, exprimée en pourcentage . 9
8.2 Calcul de la concentration en chymosine active et en pepsine bovine active en
milligrammes par litre . 9
8.3 Expression des résultats . 10
9 Fidélité . 10
9.1 Essai interlaboratoires . 10
9.2 Répétabilité . 11
9.3 Reproductibilité . 11
10 Rapport d'essai . 11
Annexe A (informative) Dosage qualitatif des enzymes de coagulation du lait dans des
coagulants commerciaux par immunodiffusion double . 13
Annexe B (informative) Essai interlaboratoires . 18
Bibliographie . 20
© ISO et FIL 2012 – Tous droits réservés iii
FIL 110:2012(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 15163FIL 110 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération Internationale du Lait (FIL). Elle est publiée conjointement par
l'ISO et la FIL.
Cette première édition de l'ISO 15163FIL 110 annule et remplace la FIL 110B:1997, qui a fait l'objet d'une
révision technique.
La présente version corrigée de l'ISO 15163FIL 110:2012 incorpore les corrections suivantes:
l’expression «coagulant issu de bovin adulte» a été remplacée par «coagulant d’origine bovine», dans la
dernière phrase de l’Article 1;
le terme «présure» a été remplacé par «coagulant d’origine bovine» en 4.11, 7.5.3, 7.6 et A.1.
iv © ISO et FIL 2012 – Tous droits réservés
FIL 110:2012(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération Internationale du Lait) est une organisation sans but lucratif représentant le secteur
laitier mondial. Les membres de la FIL se composent des Comités Nationaux dans chaque pays membre et
des associations laitières régionales avec lesquelles la FIL a signé des accords de coopération. Tout membre
de la FIL a le droit de faire partie des Comités permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux
techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et
d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
La tâche principale des Comités permanents est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de
Normes internationales adoptés par les Comités permanents sont soumis aux Comités Nationaux pour
approbation avant publication en tant que Norme internationale. La publication comme Norme internationale
requiert l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux de la FIL votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 15163FIL 110 a été élaborée par la Fédération Internationale du Lait (FIL) et le comité technique
ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publiée conjointement
par la FIL et l'ISO.
L'ensemble des travaux a été effectué par une équipe de projet ISO-FIL sur la Détermination des teneurs en
chymosine et en pepsine bovine, du comité permanent sur les Méthodes d'analyse pour les adjuvants et
indicateurs de traitement, sous la direction de son chef de projet, le professeur A. Andrén (SE).
Cette première édition de l'ISO 15163FIL 110 annule et remplace la FIL 110B:1997, qui a fait l'objet d'une
révision technique.
La présente version corrigée de l'ISO 15163FIL 110:2012 incorpore les corrections suivantes:
l’expression «coagulant issu de bovin adulte» a été remplacée par «coagulant d’origine bovine», dans la
dernière phrase de l’Article 1;
le terme «présure» a été remplacé par «coagulant d’origine bovine» en 4.11, 7.5.3, 7.6 et A.1.
© ISO et FIL 2012 – Tous droits réservés v
FIL 110:2012(F)
Introduction
Les préparations à base de présure de veau et de coagulant issu de bovin adulte contiennent toutes deux
comme enzymes coagulantes de la chymosine et de la pepsine bovine en quantités variables. La proportion
de chymosine diminue par rapport à la pepsine dans la caillette (quatrième compartiment de l'estomac) en
fonction de l'âge du veau et au moment de son sevrage.
Pour la production de coagulants d’origine bovine, le rapport des volumes de la caillette d'un bovin jeune et
d'un bovin âgé influence ainsi considérablement la composition de la chymosine et de la pepsine du
coagulant final. Plus le volume de la caillette des jeunes veaux nourris au lait est important, plus la proportion
[5][6]
de chymosine est élevée, et inversement .
La chymosine et la pepsine présentent toutes deux des caractéristiques spéciales aussi bien en ce qui
concerne l'activité de coagulation du lait que l'utilisation en fromagerie. Par exemple, l'activité de coagulation
du lait de la pepsine dépend plus du pH que celle de la chymosine. Par ailleurs, la pepsine présente
également une activité protéolytique plus générale que celle de la chymosine.
Par conséquent, il est très important d'analyser la teneur en chymosine et en pepsine en plus de la force
[6][7]
(activité totale de coagulation du lait) du coagulant d'origine bovine .
vi © ISO et FIL 2012 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE
FIL 110:2012(F)
Lait et produits laitiers — Présure de veau et coagulant issu de
bovin adulte — Détermination des teneurs en chymosine et en
pepsine bovine par chromatographie
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de référence pour la détermination des quantités de
chymosine et de pepsine bovines présentes dans un échantillon pour essai de présure de veau et de
coagulant issu de bovin adulte. De plus, elle peut être utilisée pour des mélanges de présure de
veau/coagulant d’origine bovine contenant de la chymosine bovine produite par fermentation (FPC).
2 Références normatives
Le document de référence suivant est indispensable pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 11815FIL 157:2007, Lait — Détermination de l'activité totale de coagulation du lait dans la présure de
bovins
3 Principe
Dans un premier temps, l'échantillon de coagulant d'origine bovine est dessalé puis les enzymes chymosine
[8][9]
et pepsine bovine sont séparées sur une colonne échangeuse d'anions . Dans un deuxième temps,
l'activité de coagulation du lait de chacune des deux enzymes séparées est déterminée selon
l'ISO 11815FIL 157 (lait reconstitué à pH 6,5). La composition enzymatique de l'échantillon de coagulant
d'origine bovine est exprimée soit en pourcentage d'activité de la chymosine et en pourcentage d'activité de la
pepsine de la somme des activités en unités internationales de coagulation du lait (IMCU) des deux
composants, soit en milligrammes par litre de chymosine active et en milligrammes par litre de pepsine active.
L'activité totale coagulante du lait du premier lot de poudre étalon de référence de présure de veau et du
premier lot de poudre étalon de référence de coagulant issu de bovin adulte a été établie une fois pour toutes
à 1 000 IMCU/g. Les préparations ultérieures d'étalons de référence doivent être effectuées d'après les
étalons de référence précédents (voir l'ISO 11815FIL 157).
La présente Norme internationale spécifie une méthode manuelle de chromatographie d'échange d'anions et
une autre méthode automatique.
Il s'agit d'une méthode de référence. Par conséquent, des modifications peuvent être apportées uniquement
s’il a été confirmé qu’elles donnent le même résultat et une répétabilité et une reproductibilité au moins aussi
élevées que celles obtenues avec la méthode normalisée originale. Toute modification apportée à la méthode
décrite dans la présente Norme intern
...
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 15163
IDF
Первое издание
2012-05-15
Молоко и молочные продукты.
Сычужный фермент из желудка телят и
взрослых коров. Определение
содержания химозина и говяжьего
пепсина методом хроматографии
Milk and milk products – Calf rennet and adult bovine rennet.
Determination by chromatography of chymosin and bovine pepsin
contents
Ссылочные номера
IDF 110:2012(R)
©
ISO и IDF 2012
IDF 110:2012(R)
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO и IDF 2012
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO или IDF, которое должно быть получено после запроса о разрешении,
направленного по адресу, приведенному ниже.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Silver Building • Boulevard Auguste Reyers 70/B • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.org E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Напечатан в Швейцарии
ii © ISO и IDF 2012 – Все права сохраняются
IDF 110:2012(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
Предисловие .v
Введение .vi
1 Область применение .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Принцип.1
4 Реактивы .1
5 Аппаратура.3
6 Отбор проб.4
7 Методика .4
7.1 Проверка .4
7.2 Подготовка чистой колонки со смолой Fractogel .4
7.3 Регенерация и уравновешивание смолы Fractogel в колонке .5
7.4 Хранение колонки со смолой Fractogel.5
7.5 Приготовление пробы для испытания.5
7.6 Анализ обессоленного сычужного фермента .6
7.7 Определение времени свертывания.8
8 Вычисление и представление результатов.8
8.1 Вычисление активности химозина и пепсина, выражаемой в процентах.8
8.2 Вычисление активности химозина и говяжьего пепсина, в миллиграммах на литр.9
8.3 Выражение результатов .10
9 Прецизионность.10
9.1 Межлабораторные испытания.10
9.2 Повторяемость .10
9.3 Воспроизводимость .11
10 Протокол испытания.11
Приложение A (информативное) Количественное определение молокосвертывающих
ферментов в промышленных коагулянтах методом двойной иммунодиффузии .12
Приложение B (информативное) Межлабораторные испытания .17
Библиография.19
© ISO и IDF 2012 – Все права сохраняются iii
IDF 110:2012(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией
национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных
стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член,
заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть
представленным в этом комитете. Международные правительственные и неправительственные
организации, имеющие связи с ISO, также принимают участие в этой работе. ISO работает в тесном
сотрудничестве с Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам
стандартизации в области электротехники.
Проекты международных стандартов разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов заключается в разработке международных стандартов.
Проекты международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-
членам на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения
не менее 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что, возможно, некоторые элементы настоящего документа могут быть
объектом патентных прав. ISO не несет ответственности за определение некоторых или всех таких
патентных прав.
Международный стандарт ISO 15163⎪IDF 110 был разработан Техническим комитетом ISO/TC 34,
Пищевые продукты, Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты и Международной
федерацией молочной промышленности (IDF). Стандарт опубликован ISO совместно с IDF.
Настоящее первое издание ISO 15163⎪IDF 110 отменяет и заменяет стандарт IDF 110B:1997, который
был технически пересмотрен.
iv © ISO и IDF 2012 – Все права сохраняются
IDF 110:2012(R)
Предисловие
Международная федерация молочной промышленности (IDF) является некоммерческой
всемирной федерацией предприятий молочной отрасли. Членство в IDF представлено национальными
комитетами стран, а также региональными ассоциациями молочной промышленности, подписавшими
официальное соглашение о сотрудничестве с IDF. Каждый национальный комитет имеет право быть
представленным в постоянных комитетах IDF, осуществляющих техническую работу. IDF сотрудничает
с ISO по вопросам разработки стандартных методов анализа и отбора проб молока и молочных
продуктов.
Основная задача постоянных комитетов заключается в разработке международных стандартов.
Проекты международных стандартов, принятые постоянными комитетами и рабочими группами,
рассылаются национальным комитетам для голосования. Их опубликование в качестве
международных стандартов требует одобрения не менее 50 % национальных комитетов IDF,
принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что, возможно, некоторые элементы настоящего документа могут быть
объектом патентных прав. ISO не несет ответственности за определение некоторых или всех таких
патентных прав.
ISO 15163⎪IDF 110 был разработан Международной федерацией молочной промышленности (IDF)
совместно с Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом SC 5, Молоко и
молочные продукты. Стандарт опубликован ISO совместно с IDF.
Вся работа была выполнена объединенной проектной группой ISO/IDF по Определению содержания
химозина и говяжьего пепсина Постоянного комитета по Аналитическим методам определения
технологических добавок и индикаторов под руководством проф. А.Андрена (Швеция).
Настоящее первое издание ISO 15163⎪IDF 110 отменяет и заменяет IDF 110B:1997, который был
технически пересмотрен.
© ISO и IDF 2012 – Все права сохраняются v
IDF 110:2012(R)
Введение
Препараты на основе сычужного фермента из желудка телят и взрослых животных содержат химозин и
говяжий пепсин в разных количествах в качестве основных молокосвертывающих ферментов.
Пропорция химозина по отношению к пепсину в сычуге (четвёртый отдел желудка жвачных) с
возрастом и отлучением теленка от матери уменьшается.
Соотношение сычуга молодняка к сычугу взрослых животных в сырье для производства фермента,
таким образом, сильно влияет на состав химозина и пепсина в конечном сычужном ферменте. Чем
[5][6]
больше сычуг у молодых вскормленных молоком телят, тем выше доля химозина и наоборот .
Как химозин, так и пепсин имеют особые характеристики, касающиеся молокосвертывающей
активности и пригодности для производства сыров. Молокосвертывающая активность пепсина,
например, намного больше зависит от показателя pH, чем активность химозина, кроме того, пепсин
также имеет более общую протеолитическую активность, чем химозин.
Поэтому, важно проанализировать содержание химозина и пепсина в дополнение к концентрации
[6][7]
(общей молокосвертывающей активности) сычужного фермента .
vi © ISO и IDF 2012 – Все права сохраняются
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ
IDF 110:2012(R)
Молоко и молочные продукты. Сычужный фермент из
желудка телят и взрослых коров. Определение содержания
химозина и говяжьего пепсина методом хроматографии
1 Область применение
Настоящий международный стандарт устанавливает контрольный метод определения количества
химозина и говяжьего пепсина в пробе сычужного фермента телят и взрослых животных. Кроме того,
стандарт может применяться для приготовления смесей сычужного фермента телят/взрослых особей
крупного рогатого скота с полученным в процессе ферментации говяжьим химозином.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении данного
документа. Для жестких ссылок применяется только цитированное издание документа. Для плавающих
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 11815⎪IDF 157:2007, Молоко. Определение общей молокосвертывающей активности говяжьего
сычужного фермента
3 Принцип
На первом этапе, пробу сычужного фермента обессоливают, а химозин и говяжий пепсин в ферментах
[8][9]
разделяют на анионообменной колонке . На втором этапе, определяют молочносвертывающую
активность каждого из двух разделенных ферментов в соответствии с ISO 11815⎪IDF 157
(восстановленного молока с рН 6,5). Ферментативный состав пробы сычужного фермента выражают в
процентах активности химозина и пепсина от суммы активностей обоих компонентов в соответствии с
Международными молокосвертывающими единицами (ММЕ), или результаты выражают в
миллиграммах на литр активного химозина и миллиграммах на литр активного пепсина.
Общая молокосвертывающая активность первой партии контрольного сычужного порошка из желудка
телят и первой партии контрольного сычужного порошка от взрослых животных раз и навсегда была
установлена на уровне 1000 ММЕ/г. Будущие препараты стандартных проб должны быть установлены
относительно предыдущих стандартных проб (см. ISO 11815⎪IDF 157).
Данный международный стандарт устанавливает требования как к ручной, так и к альтернативной
автоматизированной упаковке колонок для анионообменной хроматографии.
Это контрольный метод и, поэтому, изменения могут быть сделаны только в случае подтверждения
получения того же результата, а повторяемость и воспроизводимость, по крайней мере, так же высока,
как в исходном контрольном методе. Любые изменения установленного в настоящем стандарте
метода также должны быть указаны в протоколе испытаний (см. Раздел 10).
4 Реактивы
Если не указано иное, используют реактивы только установленной аналитической чистоты и
© ISO и IDF 2012 – Все права сохраняются 1
IDF 110:2012(R)
дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
® 1) ®
4.1 Смола, Fractogel EMD DEAE (M) (Merck cat. no. 1.16883) или Mono Q 1 мл предварительно
2)
упакованной колонки (HR 5/5 или 5/50 GL от GE Healthcare) или эквивалентная смола.
® ®
ПРИМЕЧАНИЕ 1 Fractogel EMD DEAE (M) подходящая смола для ручного ввода проб, а Mono Q подходит для
автоматического ввода. ®
ПРИМЕЧАНИЕ 2 Если смолу Fractogel или Mono Q заменить другой смолой, то скорее всего появится
необходимость заменить и буферные растворы в 4.12, что приведет к необходимости повторной оценки метода.
4.2 Пиперазина гексагидрат (C H N ⋅6H O).
4 10 2 2
4.3 Хлорид натрия (NaCl).
4.4 Тимол, необязательный консервант.
4.5 Гидроксид натрия (NaOH).
4.6 Раствор соляной кислоты solution, c(HCl) = 1 моль/л.
4.7 Этанол (C H OH), с объемной долей не менее 96 %.
2 5
4.8 Этанол (C H OH), с приближенной объемной долей не менее 20 %.
2 5
Добавляют 105 мл 96 % этанола (4.7) к 400 мл воды и перемешивают. Если требуется стерильная
фильтрация, фильтруют воду до перемешивания с этанолом.
4.9 Мочевина, c(N H CO) = 8 моль/л.
2 4
Растворяют 48 г мочевины в воде и доводят до общего объема 100 мл.
3)
4.10 Система трубок для диализа, диаметром около 1 см (Union Carbide) или эквивалентного
(необязательно).
ПРИМЕЧАНИЕ Качество системы трубок для диализа не является решающим.
4)
4.11 Колонки для обессоливания, Bio-Rad – Econopac 10DG (cat. no.
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.