ISO 10932:2010
(Main)Milk and milk products — Determination of the minimal inhibitory concentration (MIC) of antibiotics applicable to bifidobacteria and non-enterococcal lactic acid bacteria (LAB)
Milk and milk products — Determination of the minimal inhibitory concentration (MIC) of antibiotics applicable to bifidobacteria and non-enterococcal lactic acid bacteria (LAB)
ISO 10932|IDF 223:2010 specifies a method for determining the minimal inhibitory concentration (MIC) of a series of antibiotics applicable to bifidobacteria and non-enterococcal lactic acid bacteria (LAB). ISO 10932|IDF 223:2010 recommends the broth microdilution method as the standard method.
Lait et produits laitiers - Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) d'antibiotiques applicable aux bifidobacteria et bactéries lactiques non-entérocoques
General Information
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10932
IDF
First edition
2010-06-15
Milk and milk products — Determination
of the minimal inhibitory concentration
(MIC) of antibiotics applicable to
bifidobacteria and non-enterococcal
lactic acid bacteria (LAB)
Lait et produits laitiers — Détermination de la concentration minimale
inhibitrice (CMI) d'antibiotiques applicable aux bifidobacteria et
bactéries lactiques non-entérocoques
Reference numbers
IDF 223:2010(E)
©
ISO and IDF 2010
IDF 223:2010(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. Neither the ISO Central
Secretariat nor the IDF accepts any liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies
and IDF national committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the
address given below.
© ISO and IDF 2010
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective
address below.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.org E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Published in Switzerland
ii © ISO and IDF 2010 – All rights reserved
IDF 223:2010(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction.vi
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .2
4 Principle .2
5 Diluents, culture media and reagents .2
5.1 Basic materials .2
5.2 Diluents .2
5.3 Culture media.3
6 Apparatus and glassware.10
7 Sampling .11
8 Procedure.11
8.1 Propagation.11
8.2 Quality control strains and testing.12
8.3 Growth conditions for antibiotic susceptibility test .12
8.4 Preparation of microdilution plate.13
9 Expression of results.18
10 Precision .18
10.1 Interlaboratory test.18
10.2 Repeatability .18
10.3 Reproducibility .18
11 Test report.18
Annex A (informative) Interlaboratory trial.19
Bibliography.30
IDF 223:2010(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 10932⎪IDF 223 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and
IDF.
iv © ISO and IDF 2010 – All rights reserved
IDF 223:2010(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit organization representing the dairy sector worldwide.
IDF membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy
associations having signed a formal agreement on cooperation with IDF. All members of IDF have the right to
be represented on the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
The main task of Standing Committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the Standing Committees are circulated to the National Committees for endorsement prior to
publication as an International Standard. Publication as an International Standard requires approval by at least
50 % of IDF National Committees casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 10932⎪IDF 223 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical Committee
ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published jointly by IDF
and ISO.
All work was carried out by a Joint ISO-IDF Project Group on Minimal inhibitory concentration (MIC) of
antibiotics of the Standing Committee on Analytical methods for dairy microorganisms under the aegis of its
project leader, Mr. M. Danielsen (DK).
IDF 223:2010(E)
Introduction
There are several reports on minimal inhibitory concentration (MIC) determination of lactic acid bacteria
according to various methods. However, the MIC value obtained depends on the determination used and the
strain cultivation technique. For example, MIC determined by different quantitative methods are not always
equivalent. Also some media components are antagonistic to certain antibiotics.
Consequently, a standardized MIC determination which employs a suitable growth medium having little or no
antagonistic effects towards the antibiotics studied is necessary.
Two EU projects (PROSAFE and ACE-ART) were launched to tackle these issues, and propose appropriate
media and method to measure MIC. This International Standard is based on the SOP (standard operating
procedure) proposed by ACE-ART.
vi © ISO and IDF 2010 – All rights reserved
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 223:2010(E)
Milk and milk products — Determination of the minimal
inhibitory concentration (MIC) of antibiotics applicable to
bifidobacteria and non-enterococcal lactic acid bacteria (LAB)
WARNING — Antibiotics are substances that may be hazardous. Necessary precautions should be
taken to avoid contact with these substances. In particular, kanamycin may cause harm to the unborn
child (risk phrase R61) and chloramphenicol may cause cancer (risk phrase R45).
1 Scope
This International Standard specifies a method for determining the minimal inhibitory concentration (MIC) of a
series of antibiotics applicable to bifidobacteria and non-enterococcal lactic acid bacteria (LAB).
NOTE Unlike the disk diffusion method, which is semi-quantitative, the frequently used broth microdilution method
gives quantitative MICs of the test organism in a dilution series of the antibiotics. The lowest concentration of an antibiotic
that prevents visible growth of a test organism is considered to be the MIC.
This International Standard recommends the broth microdilution method as the standard method.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887-5, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 5: Specific rules for the preparation of milk and
milk products
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the
laboratory
ISO/TS 11133-2, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production
of culture media — Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media
IDF 223:2010(E)
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
minimal inhibitory concentration
MIC
lowest concentration that, under defined in vitro conditions, prevents visible growth of bacteria within a defined
period of time
[6]
[ISO 20776-1:2006 , 2.4]
NOTE MIC is expressed in micrograms per millilitre.
4 Principle
Most individual colonies from an agar plate are picked up and suspended in sterile saline. However,
Bifidobacterium spp. are suspended in pre-reduced LSM-Cys medium.
The bacterial suspension is diluted with recommended medium.
The microdilution plate is prepared with a series of twofold dilutions of antibiotic.
The diluted bacterial suspension is distributed into the wells of the plate and incubated under recommended
conditions.
The lowest concentration of an antibiotic that prevents visible growth is considered to be the MIC.
5 Diluents, culture media and reagents
5.1 Basic materials
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and sterile distilled or
demineralized water or water of equivalent purity. See ISO 6887-5.
5.2 Diluents
See ISO 6887-5.
2 © ISO and IDF 2010 – All rights reserved
IDF 223:2010(E)
5.3 Culture media
5.3.1 MRS agar
5.3.1.1 Composition
Peptone 1 (tryptic digest of casein) 10,0 g
Meat extract 10,0 g
Yeast extract (dried) 5,0 g
Glucose 20,0 g
a
Polysorbate 80 (polyethoxylated sorbitan mono-oleate) 1,0 ml
Dipotassium hydrogen phosphate (K HPO) 2,0 g
2 4
Sodium acetate trihydrate (NaCH CO ·3HO) 5,0 g
3 2 2
Diammonium citrate [(NH ) HC H O] 2,0 g
4 2 6 5 7
Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO ·7HO) 0,2 g
4 2
Manganese sulfate tetrahydrate (MnSO ·4HO) 0,05 g
4 2
b
Agar 10 g to 15 g
c
Water up to 1 000 ml
a
Tween 80 is an example of a suitable product available commercially. This information is
...
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 10932
IDF
Первое издание
2010-06-15
Молоко и молочные продукты
Определение минимальной
подавляющей концентрации (MIC)
антибиотиков, применяемым к
бифидобактериям (LAB)
Milk and milk products – Determination of the minimal inhibitory
concentration (MIC) of antibiotics applicable to bifidobacteria (LAB)
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава
Ссылочные номера
IDF 223:2010(R)
©
ISO и IDF 2010
IDF 223:2010(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe - торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO и IDF 2010
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
разрешения в письменной форме от ISO или IDF, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного
по адресу, приведенному ниже.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.org E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются
IDF 223:2010(R)
Содержание Страница
Предисловие . iv
Введение . vi
1 Область применения . 1
2 Нормативные ссылки . 1
3 Термины и определения . 2
4 Сущность метода . 2
5 Разбавители, питательные среды и реактивы . 2
5.1 Основные материалы . 2
5.2 Разбавители. 2
5.3 Питательные среды . 3
6 Аппаратура и стеклянная лабораторная посуда . 12
7 Отбор проб . 13
8 Проведение испытания . 13
8.1 Выращивание . 13
8.2 Штаммы для контроля качества и испытания . 14
8.3 Условия выращивания бактерий для анализа на восприимчивость к антибиотикам . 14
8.4 Подготовка планшета для микро-разведений . 15
9 Обработка результатов . 19
10 Прецизионность . 19
10.1 Межлабораторные испытания . 19
10.2 Повторяемость (сходимость) . 20
10.3 Воспроизводимость . 20
11 Протокол испытания . 20
Приложение A (информативное) Межлабораторные испытания . 21
Библиография . 32
© ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются iii
IDF 223:2010(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией
национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных
стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член,
заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть
представленным в этом комитете. Международные правительственные и неправительственные
организации, имеющие связи с ISO, также принимают участие в работах. ISO тесно сотрудничает с
Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области
электротехники.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Для опубликования их в качестве международного стандарта требуется одобрение не
менее 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует учитывать возможность того, что некоторые элементы настоящего документа могут быть
предметом патентного права. ISO не несет ответственности за идентификацию любого из таких
патентных прав.
ISO 10932IDF 223 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты,
Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты, и Международной молочной федерацией (IDF).
Публикуется совместно ISO и IDF.
iv © ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются
IDF 223:2010(R)
Предисловие
Международная Молочная Федерация (IDF) является некоммерческой организацией,
представляющей всемирное молочное животноводство. Членами IDF являются Национальные
комитеты каждой страны-члена, а также региональные ассоциации по молочному животноводству,
которые имеют подписанное официальное соглашение о совместной деятельности с IDF. Каждый член
IDF имеет право быть представленным в Постоянных комитетах IDF, осуществляющих техническую
работу. IDF сотрудничает с ISO по вопросам разработки стандартных методов анализа и отбора проб
молока и молочных продуктов.
Основная задача Постоянных комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые Постоянными комитетами, рассылаются Национальным
комитетам для утверждения до опубликования в качестве международных стандартов. Их
опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения не менее 50 %
Национальных комитетов IDF, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего документа могут быть объектом патентных
прав. IDF не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных
прав.
ISO 10932IDF 223 был подготовлен Международной молочной федерацией (IDF) и Техническим
комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты.
Публикуется совместно IDF и ISO.
Вся работа была выполнена объединенной Рабочей группой ISO-IDF по Минимальной подавляющей
концентрации (MIC) антибиотиков Постоянного комитета по Методам анализа молочнокислых
микроорганизмов под руководством , г-на. M. Даниэльсона (Дания).
© ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются v
IDF 223:2010(R)
Введение
Опубликовано несколько отчетов по определению различными методами минимальной дозы
ингибитора (MIC) молочнокислых бактерий. Однако, полученное значение MIC зависит от
использованного определения и техники выращивания штамма. Например, MIC, определенная
различными количественными методами, не всегда одинакова. Также некоторые компоненты сред
являются антагонистичными к определенным антибиотикам.
Следовательно, необходимо стандартизованное определение MIC, в котором используется
подходящая питательная среда, имеющая незначительное антагонистическое воздействие или совсем
не имеющая такого воздействия в отношении изучаемых антибиотиков.
Два проекта ЕС (PROSAFE и ACE-ART) были запущены для решения этой проблемы, были
предложены подходящие питательные среды и метод измерения MIC. Настоящий международный
стандарта основан на стандартной рабочей методике (SOP), предложенной в проекте ACE-ART.
vi © ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ
IDF 223:2010(R)
Молоко и молочные продукты Определение минимальной
подавляющей концентрации (MIC) антибиотиков,
применяемым к бифидобактериям (LAB)
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Антибиотики являются веществами, которые могут быть опасными.
Следует принять определенные меры, чтобы избежать контакта с этими веществами. В
частности, канамицин может причинить вред нерожденному ребенку (фраза риска R61)
хлорамфеникол может вызвать раковые заболевания (фраза риска R45).
1 Область применения
Настоящий международный стандарт устанавливает метод определения минимальной подавляющей
концентрации (MIC) серии антибиотиков применительно к бифидобактериям и молочнокислым
бактериям (LAB), исключая энтерекокки.
ПРИМЕЧАНИЕ В отличие от диско-диффузионного метода, который является полуколичественным, часто
используемый метод микро-разведений бульона дает количественные MIC испытуемого микроорганизма в серии
разбавления антибиотиков. Наименьшая концентрация антибиотика, которая предотвращает видимый рост
испытуемого организма, считается минимальной подавляющей концентрацией (MIC).
Настоящий международный стандарт рекомендует метод микро-разведений бульона в качестве
стандартного метода.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные документы обязательны для применения данного документа. Для
датированных ссылок применяется только указанное издание. Для недатированных ссылок
применяется самое последнее издание указанного документа (включая все изменения).
ISO 6887-5, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для
испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований.
Часть 5. Специальные правила для приготовления молока и молочных продуктов
ISO 7218, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и
рекомендации по микробиологическим исследованиям
ISO/TS 11133-1, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания
по приготовлению и производству питательных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по
обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории
ISO/TS 11133-2, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный
метод обнаружения и подсчета бактерий Campylobacter spp. Часть 2. Метод подсчета колоний
© ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются 1
IDF 223:2010(R)
3 Термины и определения
Применительно к данному документу используются следующие термины и определения.
3.1
минимальная подавляющая концентрация
minimal inhibitory concentration
MIC
Самая низкая концентрация, определенная в условиях in vitro, предупреждает видимый рост бактерий
в рамках определенного периода времени
[6]
[ISO 20776-1:2006 , 2.4]
ПРИМЕЧАНИЕ MIC выражается в микрограммах на миллилитр.
4 Сущность метода
Большинство отдельных колоний, выращенных на чашке с агаровой средой, собирают и суспендируют
в стерильном физиологическом растворе, а бактерии Bifidobacterium spp. помещают в предварительно
восстановленную среду LSM-Cys.
Бактериальную суспензию разбавляют рекомендованной средой.
Готовят планшет для микро-разведений с серией двукратных разведений антибиотика.
Разбавленную бактериальную суспензию распределяют по лункам планшета и инкубируют в
рекомендованных условиях.
Самая низкая концентрация антибиотика, которая предотвращает видимый рост бактерий, считается
минимальной подавляющей концентрацией (MIC).
5 Разбавители, питательные среды и реактивы
5.1 Основные материалы
Используют только реактивы признанной аналитической чистоты, если нет иных указаний, и
стерильную дистиллированную или деминерализованную воду или воду равноценной чистоты.
См. ISO 6887-5.
5.2 Разбавители
См. ISO 6887-5.
2 © ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются
IDF 223:2010(R)
5.3 Питательные среды
5.3.1 Агар MRS
5.3.1.1 Состав
Пептон 1 (триптический гидролизат казеина) 10,
...
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 10932
IDF
Первое издание
2010-06-15
Молоко и молочные продукты
Определение минимальной
подавляющей концентрации (MIC)
антибиотиков, применяемым к
бифидобактериям (LAB)
Milk and milk products – Determination of the minimal inhibitory
concentration (MIC) of antibiotics applicable to bifidobacteria (LAB)
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава
Ссылочные номера
IDF 223:2010(R)
©
ISO и IDF 2010
IDF 223:2010(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe - торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO и IDF 2010
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
разрешения в письменной форме от ISO или IDF, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного
по адресу, приведенному ниже.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.org E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются
IDF 223:2010(R)
Содержание Страница
Предисловие . iv
Введение . vi
1 Область применения . 1
2 Нормативные ссылки . 1
3 Термины и определения . 2
4 Сущность метода . 2
5 Разбавители, питательные среды и реактивы . 2
5.1 Основные материалы . 2
5.2 Разбавители. 2
5.3 Питательные среды . 3
6 Аппаратура и стеклянная лабораторная посуда . 12
7 Отбор проб . 13
8 Проведение испытания . 13
8.1 Выращивание . 13
8.2 Штаммы для контроля качества и испытания . 14
8.3 Условия выращивания бактерий для анализа на восприимчивость к антибиотикам . 14
8.4 Подготовка планшета для микро-разведений . 15
9 Обработка результатов . 19
10 Прецизионность . 19
10.1 Межлабораторные испытания . 19
10.2 Повторяемость (сходимость) . 20
10.3 Воспроизводимость . 20
11 Протокол испытания . 20
Приложение A (информативное) Межлабораторные испытания . 21
Библиография . 32
© ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются iii
IDF 223:2010(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией
национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных
стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член,
заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть
представленным в этом комитете. Международные правительственные и неправительственные
организации, имеющие связи с ISO, также принимают участие в работах. ISO тесно сотрудничает с
Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области
электротехники.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в
Директивах ISO/IEC, Часть 2.
Основная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Для опубликования их в качестве международного стандарта требуется одобрение не
менее 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Следует учитывать возможность того, что некоторые элементы настоящего документа могут быть
предметом патентного права. ISO не несет ответственности за идентификацию любого из таких
патентных прав.
ISO 10932IDF 223 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты,
Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты, и Международной молочной федерацией (IDF).
Публикуется совместно ISO и IDF.
iv © ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются
IDF 223:2010(R)
Предисловие
Международная Молочная Федерация (IDF) является некоммерческой организацией,
представляющей всемирное молочное животноводство. Членами IDF являются Национальные
комитеты каждой страны-члена, а также региональные ассоциации по молочному животноводству,
которые имеют подписанное официальное соглашение о совместной деятельности с IDF. Каждый член
IDF имеет право быть представленным в Постоянных комитетах IDF, осуществляющих техническую
работу. IDF сотрудничает с ISO по вопросам разработки стандартных методов анализа и отбора проб
молока и молочных продуктов.
Основная задача Постоянных комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые Постоянными комитетами, рассылаются Национальным
комитетам для утверждения до опубликования в качестве международных стандартов. Их
опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения не менее 50 %
Национальных комитетов IDF, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего документа могут быть объектом патентных
прав. IDF не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных
прав.
ISO 10932IDF 223 был подготовлен Международной молочной федерацией (IDF) и Техническим
комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты.
Публикуется совместно IDF и ISO.
Вся работа была выполнена объединенной Рабочей группой ISO-IDF по Минимальной подавляющей
концентрации (MIC) антибиотиков Постоянного комитета по Методам анализа молочнокислых
микроорганизмов под руководством , г-на. M. Даниэльсона (Дания).
© ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются v
IDF 223:2010(R)
Введение
Опубликовано несколько отчетов по определению различными методами минимальной дозы
ингибитора (MIC) молочнокислых бактерий. Однако, полученное значение MIC зависит от
использованного определения и техники выращивания штамма. Например, MIC, определенная
различными количественными методами, не всегда одинакова. Также некоторые компоненты сред
являются антагонистичными к определенным антибиотикам.
Следовательно, необходимо стандартизованное определение MIC, в котором используется
подходящая питательная среда, имеющая незначительное антагонистическое воздействие или совсем
не имеющая такого воздействия в отношении изучаемых антибиотиков.
Два проекта ЕС (PROSAFE и ACE-ART) были запущены для решения этой проблемы, были
предложены подходящие питательные среды и метод измерения MIC. Настоящий международный
стандарта основан на стандартной рабочей методике (SOP), предложенной в проекте ACE-ART.
vi © ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ
IDF 223:2010(R)
Молоко и молочные продукты Определение минимальной
подавляющей концентрации (MIC) антибиотиков,
применяемым к бифидобактериям (LAB)
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Антибиотики являются веществами, которые могут быть опасными.
Следует принять определенные меры, чтобы избежать контакта с этими веществами. В
частности, канамицин может причинить вред нерожденному ребенку (фраза риска R61)
хлорамфеникол может вызвать раковые заболевания (фраза риска R45).
1 Область применения
Настоящий международный стандарт устанавливает метод определения минимальной подавляющей
концентрации (MIC) серии антибиотиков применительно к бифидобактериям и молочнокислым
бактериям (LAB), исключая энтерекокки.
ПРИМЕЧАНИЕ В отличие от диско-диффузионного метода, который является полуколичественным, часто
используемый метод микро-разведений бульона дает количественные MIC испытуемого микроорганизма в серии
разбавления антибиотиков. Наименьшая концентрация антибиотика, которая предотвращает видимый рост
испытуемого организма, считается минимальной подавляющей концентрацией (MIC).
Настоящий международный стандарт рекомендует метод микро-разведений бульона в качестве
стандартного метода.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные документы обязательны для применения данного документа. Для
датированных ссылок применяется только указанное издание. Для недатированных ссылок
применяется самое последнее издание указанного документа (включая все изменения).
ISO 6887-5, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для
испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований.
Часть 5. Специальные правила для приготовления молока и молочных продуктов
ISO 7218, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и
рекомендации по микробиологическим исследованиям
ISO/TS 11133-1, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания
по приготовлению и производству питательных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по
обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории
ISO/TS 11133-2, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный
метод обнаружения и подсчета бактерий Campylobacter spp. Часть 2. Метод подсчета колоний
© ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются 1
IDF 223:2010(R)
3 Термины и определения
Применительно к данному документу используются следующие термины и определения.
3.1
минимальная подавляющая концентрация
minimal inhibitory concentration
MIC
Самая низкая концентрация, определенная в условиях in vitro, предупреждает видимый рост бактерий
в рамках определенного периода времени
[6]
[ISO 20776-1:2006 , 2.4]
ПРИМЕЧАНИЕ MIC выражается в микрограммах на миллилитр.
4 Сущность метода
Большинство отдельных колоний, выращенных на чашке с агаровой средой, собирают и суспендируют
в стерильном физиологическом растворе, а бактерии Bifidobacterium spp. помещают в предварительно
восстановленную среду LSM-Cys.
Бактериальную суспензию разбавляют рекомендованной средой.
Готовят планшет для микро-разведений с серией двукратных разведений антибиотика.
Разбавленную бактериальную суспензию распределяют по лункам планшета и инкубируют в
рекомендованных условиях.
Самая низкая концентрация антибиотика, которая предотвращает видимый рост бактерий, считается
минимальной подавляющей концентрацией (MIC).
5 Разбавители, питательные среды и реактивы
5.1 Основные материалы
Используют только реактивы признанной аналитической чистоты, если нет иных указаний, и
стерильную дистиллированную или деминерализованную воду или воду равноценной чистоты.
См. ISO 6887-5.
5.2 Разбавители
См. ISO 6887-5.
2 © ISO и IDF 2010 – Все права сохраняются
IDF 223:2010(R)
5.3 Питательные среды
5.3.1 Агар MRS
5.3.1.1 Состав
Пептон 1 (триптический гидролизат казеина) 10,
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.