ISO/FDIS 16958

TC /SC
Date: 2025-05-20
ISOISO/FDIS 16958 | :2025(en)
IDF 231:2025(Een)
ISO/TC /34/SC /5/WG
Secretariat: NEN
Date: 2025-08-28
Milk, milk products, infant formula and adult nutritionals —
Determination of fatty acids composition — Capillary gas
chromatographic method
Lait, produits laitiers, formules infantiles et produits nutritionnels pour adultes — Détermination de
la composition en acides gras — Méthode de chromatographie en phase gazeuse sur colonne
capillaire
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publication may be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical,
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Website: www.fil-idf.org
Published in Switzerland
Contents
Foreword. iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 6
7 Sampling . 9
8 Preparation of test sample . 10
8.1 Liquid and powder milk and infant formula with a fat content ≥ 1,5 % (mass fraction) . 10
8.2 Liquid and powder milk and infant formula with a fat content < 1,5 % (mass fraction) . 10
8.3 Cheese . 10
9 Procedure . 10
9.1 Test portion . 10
9.2 Quantitative determination . 11
9.2.1 Determination of response factors . 11
9.2.2 Determination of the test portion . 11
9.2.3 Fatty acid identification . 11
10 Calculation and expression of results . 13
10.1 Calculation . 13
10.1.1 Calculation of response factor . 13
10.1.2 Fatty acids on the product . 14
10.1.3 Fatty acids on the total fat . 15
10.1.4 Sum of class or group of fatty acids in 100 g product . 15
10.1.5 Sum of class or group of fatty acids in 100 g fat . 15
10.1.6 Performance of the transesterification . 15
10.2 Expression of results . 16
11 Precision . 16
11.1 Interlaboratory test . 16
11.2 Repeatability. 16
11.3 Reproducibility . 17
11.4 Limit of detection (LOD) . 17
11.5 Limit of quantitation (LOQ) . 17
12 Test report . 17
Annex A (normative) Groups or classes of fatty acids and individual fatty acids . 18
Annex B (normative) Gas–liquid chromatographic analysis . 23
Annex C (informative) Results of an interlaboratory trial . 37
Bibliography . 55

iii
ForewordsForeword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations,
governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely
with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types
of ISO documentsdocument should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial
rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawnISO draws attention to the possibility that some of the elementsimplementation of this
document may beinvolve the subjectuse of (a) patent(s). ISO takes no position concerning the evidence,
validity or applicability of any claimed patent rights in respect thereof. As of the date of publication of this
document, ISO had not received notice of (a) patent(s) which may be required to implement this document.
However, implementers are cautioned that this may not represent the latest information, which may be
obtained from the patent database available at www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for
identifying any or all such patent rights. Details of any patent rights identified during the development of the
document will be in the Introduction and/or on the ISO list of patent declarations received (see ).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation onof the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT)), see
www.iso.org/iso/foreword.htmlthe following URL: .
The committee responsible for thisThis document iswas prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food
products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in
collaboration with AOAC INTERNATIONAL., and in collaboration with the European Committee for
Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 302, Milk and milk products - Methods of sampling and
analysis, in accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna
Agreement). It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC INTERNATIONAL. The
method described in this International Standard is equivalent to the AOAC Official Method 2012.13:
Determination of labeled fatty acids content in milk products and infant formula.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 16958 | IDF 231:2015), of which has
undergoneit constitutes a minor revision.
The main changes are as follows:
— references to other standards have been updated;
— information on standard solutions and chromatographic columns has been updated;
— the Bibliography has been expanded.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit private sector organization representing the
interests of various stakeholders in dairying at the global level. IDF members are organized in National
Committees, which are national associations composed of representatives of dairy-related national interest
groups including dairy farmers, dairy processing industry, dairy suppliers, academics and
governments/food control authorities.
ISO and IDF collaborate closely on all matters of standardization relating to methods of analysis and sampling
for milk and milk products. Since 2001, ISO and IDF jointly publish their International Standards using the
logos and reference numbers of both organizations.
Attention is drawnIDF draws attention to the possibility that some of the elementsimplementation of this
document may beinvolve the subjectuse of (a) patent(s). IDF takes no position concerning the evidence,
validity or applicability of any claimed patent rights in respect thereof. As of the date of publication of this
document, IDF had not received notice of (a) patent(s) which may be required to implement this document.
However, implementers are cautioned that this may not represent the latest information, which may be
obtained from the patent database available at www.iso.org/patents. IDF shall not be held responsible for
identifying any or all such patent rights. Details of any patent rights identified during the development of the
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constitute an endorsement.
ISO 16958 | IDF 231This document was prepared by the IDF Standing Committee on Analytical Methods for
Composition and the ISO Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5 on, Milk and
milk products (ISO/TC 34/SC 5),, in collaboration with AOAC INTERNATIONAL. It is being published jointly
by ISO and IDF, and separately by AOAC INTERNATIONAL. The method described in this International
Standard is equivalent to the AOAC Official Method 2012.13: Determination of labeled fatty acids content in
milk products and infant formula
All work was carried out by the ISO-IDF Project Group C11 of the Standing Committee on Analytical Methods
for Composition under the aegis of its project leader, Mr Pierre-Alain Golay (CH).
v
FINAL DRAFT International Standard ISO/FDIS 16958:2025(en)
IDF 231:2025(en)
Milk, milk products, infant formula and adult nutritionals —
Determination of fatty acids composition — Capillary gas
chromatographic method
1 Scope
This document specifies a method for the quantification of individual and/or all fatty acids content in the
profile of milk, milk products, infant formula and adult nutritional formula, containing milk fat and/or
vegetable oils, supplemented or not supplemented with oils rich in long chain polyunsaturated fatty acids
(LC-PUFA). This also includes groups of fatty acids often labelled [i.e. trans fatty acids (TFA), saturated fatty
acids (SFA), monounsaturated fatty acids (MUFA), polyunsaturated fatty acids (PUFA), omega-3, omega-6
and omega-9 fatty acids] and/or individual fatty acids [i.e. linoleic acid (LA), α-linolenic acid (ALA),
arachidonic acid (ARA), eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA)].
The determination is performed by direct transesterification in food matrices, without prior fat extraction,
and consequently it is applicable to liquid samples or reconstituted powder samples with water having total
fat ≥ 1,5 % m/m.(mass fraction).
The fat extracted from products containing less than 1,5 % m/m(mass fraction) fat can be analysed with the
same method after a preliminary fat extraction using methods referenced in Clause 2. Dairy products,
likesuch as soft or hard cheeses with acidity level ≤ 1 mmol/100 g of fat, can be analysed after a preliminary
fat extraction using methods referenced in Clause 2.
For products supplemented or enriched with PUFA with fish oil or algae origins, the evaporation of solvents
should beis performed at the lowest possible temperature (e.g. max. 40 °C) to recover these sensitive fatty
acids.
2 Normative references
The following documents, are referred to in wholethe text in such a way that some or in part, are normatively
referenced inall of their content constitutes requirements of this document and are indispensable for its
application. For dated references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of
the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 1042, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks
ISO 23319 | IDF 250, Cheese and processed cheese products, caseins and caseinates — Determination of fat
content — Gravimetric method
ISO 1740 | IDF 6, Milk fat Milkfat products and butter — Determination of fat acidity (Reference method)
ISO 14156 | IDF 172, Milk and milk products — Extraction methods for lipids and liposoluble compounds
ISO 23319 | IDF 250, Cheese and processed cheese products, caseins and caseinates — Determination of fat
content — Gravimetric method
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia: available at https://www.electropedia.org/
3.1
fatty acids content
mass fraction of individual or groups of substances determined by the procedure specified in this
International Standard
Note 1 to entry: The fatty acids content is determined by the procedure specified in this International Standard. Note 1
to entry See Table A.1.
Note 2 to entry: The fatty acid acids content is expressed as a mass fraction in grams (or in milligrams) of the fatty acids
per 100 g of product. Fatty acid results can be converted into other results expression formats (see 10.2).
4 Principle
Addition of the internal standard solution to the sample, preparation of fatty acid methyl esters (FAMEs) by
direct transesterification with methanolic sodium methoxide for liquid samples; dissolution (i.e.
reconstitution) in water for powder sample and direct transesterification with methanolic sodium
methoxide. The same transesterification procedure is applied to fat extracted from various foods (e.g. low
fat products, cheeses).
Separation of FAMEs is done by using capillary gas-liquid chromatography. Identification of FAMEs is done
by comparison with the retention time of pure standards and quantification as fatty acids by reference to an
internal standard (C11:0 FAME) and instrument response factors. Verification of the transesterification
performance using a second internal standard (C13:0 TAG).
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.
5.1 n-Hexane, [CH (CH ) CH ], chromatography grade or n-heptane, [CH (CH ) CH ], chromatography
3 2 4 3 3 2 5 3
grade.
5.2 Methanol, [CH3OH], chromatography grade.
5.3 Water, HPLC grade or equivalent purity quality.
5.4 Sodium methoxide solution, [CH ONa], dissolved in methanol 30 % m/v, or 25 % m/v, depending on
local availability.
5.5 Transesterification solution, (sodium methoxide solution 5 % m/v in methanol).
Into a 250 ml volumetric flask, pipette 42 ml (or 50 ml) of sodium methoxide solution 30 % m/v (or 25 %
m/v) and mix gently with 200 ml of methanol using a magnetic stirrer. Remove the magnetic stirrer (i.e.
using a rigid rod with magnetic extremity), then cool to room temperature and make up to the mark with
methanol.
Stored in the dark at 4 °C, this solution is stable for one week. Allow the solution to come to room
temperature before use. This solution volume is sufficient to analyse approximately 40 samples. In casecases
of a smaller number of analyses, the reagent volume can be adapted accordingly.
Perform the transesterification reaction at ambient temperature (between 20 °C and 25 °C).
NOTE Value indicated in brackets () corresponds to sodium methoxide solution with 25 % m/v concentration.
5.6 di-Sodium hydrogen citrate sesquihydrate, [HOC(COOH)(CH2COONa)2.1,5 H2O].
5.7 Sodium chloride, [NaCl].
5.8 Neutralization solution, (di-sodium hydrogen citrate sesquihydrate 10 % m/v, sodium chloride 15 %
m/v in water).
Weigh 50,0 g of di-sodium hydrogen citrate sesquihydrate and 75,0 g of sodium chloride in a 500 ml
volumetric flask. Dissolve in 450 ml of water using a magnetic stirrer. Remove the magnetic stirrer, then
make up to the mark with water.
Stored in the dark at 4 °C, this solution is stable for one month. Presence of salt crystals may appear in the
solution during storage, but disappear after shaking.
Allow the solution to come to room temperature before use. This solution volume is sufficient to analyse
approximately 40 samples or more. In casecases of a smaller number of analyses (or single analysis), the
mass and volume of solution can be adapted accordingly.
5.9 Tert-butyl methyl ether (MTBE), chromatography grade.
5.10 Methyl undecanoate (C11:0 FAME), of purity ≥ 99 % mass fraction.
5.11 Tritridecanoin (C13:0 TAG), of purity ≥ 99 % mass fraction.
5.12 C11:0 FAME/C13:0 TAG standard solution.
Into a 250 ml volumetric flask, weigh to the nearest 0,1 mg about 500 mg of tritridecanoin and 500 mg of
methyl undecanoate. Dissolve and make up to the mark with MTBE.
Stored in the dark at 4 °C, this solution is stable for one week. Allow the solution to come to room
temperature before use.
This solution volume is sufficient to analyse approximately 40 samples or more. In casecases of a smaller
number of analyses, standard mass and volume of solvent can be adapted accordingly.
5.13 Octadecenoic acid methyl esters, cis and trans isomers mixture of C18:1 with trans-4 to trans-16
octadecenoic (all isomers) and principal cis isomers (concentration 2,5 mg/ml in methylene chloride).
NOTE This standard is commercially available from Sigma-Aldrich, brand of Merck (Cat. 40495-U) ), or Cayman
1) 1
Chemical (cat. 29363) ).
5.14 Linoleic acid methyl esters, cis and trans isomers mixture of C18:2 with trans-9,trans-12-
octadecadienoic acid (approximately 50 %), cis-9,trans-12-octadecadienoic acid (approximately 20 %),
trans-9,cis-12-octadecadienoic acid (approximately 20 %) and cis-9,cis-12-octadecadienoic acid
(approximately 10 %). Concentration 10 mg/ml in methylene chloride.

Sigma-Aldrich, brand of Merck, and Cayman Chemical are examples of suitable product available commercially. This information
is given for the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by either ISO or IDF of the products
named. Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the same results.
2 1)
NOTE This standard is commercially available from Sigma-Aldrich, brand of Merck (Cat. L8404) . .
5.15 Linolenic acid methyl esters, cis and trans isomers mixture of C18:3 with:
— cis-9,cis-12,cis-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 3 % m/m),(mass fraction));
— cis-9,cis-12,trans-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 7 % m/m),(mass fraction));
— cis-9,trans-12,cis-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 7 % m/m),(mass fraction));
— cis-9,trans-12,trans-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 15 % m/m),(mass fraction));
— trans-9,cis-12,cis-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 7 % m/m),(mass fraction));
— trans-9,cis-12,trans-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 15 % m/m),(mass fraction));
— trans-9,trans-12,cis-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 15 % m/m), and(mass
fraction));
— trans-9,trans-12,trans-15-octadecatrienoic acid methyl ester (approximately 30 % m/m).(mass
fraction)).
Concentration 10 mg/ml in methylene chloride.
1)
NOTE This standard is commercially available from Sigma-Aldrich, brand of Merck (Cat. L6031) . This standard
contains all trans isomers of C18:3 (eight in total) but their abundance and ratio are different to those observed in
refined/deodorized oils and fats.
5.16 Methyl octadecadienoate conjugated acids, mixture of C18:2 cis-9,trans-11 and cis-10,trans-12-
octadecadienoate conjugated acids, of purity ≥ 99 % mass fraction.
1)
NOTE This standard is commercially available from Sigma-Aldrich, brand of Merck (Cat. O5507) . This standard
contains the two principal CLA isomers, but the isomer ratio maycan vary from lot to lot.
5.17 Qualitative cis and trans isomers standard mixture solution
For the retention time (RT) identification of cis and trans isomers (i.e. C18:1, C18:2, C18:3 and CLA), prepare
a qualitative standard solution with the standards listed in 5.13 to 5.16. All standards that are commercially
available couldcan be used. Into a 50 ml volumetric flask, add each standard isomer solution in equal
proportion. Dissolve and make up to the mark with n-hexane or n-heptane. Dilute in accordance with the
type of injector used.
5.18 FAME standards calibration solution
5.18.1 Preparation with individual FAME standards
5.18.1.1 Individual FAME standards
Purchase individual FAME standards as follows (purity ≥ 99 %):

Sigma-Aldrich, brand of Merck, is an example of suitable product available commercially. This information is given for the
convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by either ISO or IDF of the product named. Equivalent
products may be used if they can be shown to lead to the same results.
Butyric acid methyl ester (C4:0), caproic acid methyl ester (C6:0), caprylic acid methyl ester (C8:0), capric
acid methyl ester (C10:0), undecanoic acid methyl ester (C11:0), lauric acid methyl ester (C12:0), tridecanoic
acid methyl ester (C13:0), myristic acid methyl ester (C14:0), myristoleic acid methyl ester (C14:1 cis-9 or
n-5), pentadecanoic acid methyl ester (C15:0), cis-10-pentadecenoic acid methyl ester (C15:1 cis-10 n-5),
palmitic acid methyl ester (C16:0), palmitoleic acid methyl ester (C16:1 cis-9 or n-7), heptadecanoic acid
methyl ester (C17:0), cis-10-heptadecenoic acid methyl ester (C17:1 cis-10 or n-7), stearic acid methyl ester
(C18:0), elaidic acid methyl ester (C18:1 trans-9 or n-9), oleic acid methyl ester (C18:1 cis-9 or n-9),
linolelaidic acid methyl ester (C18:2 all trans-9,12 or n-6), linoleic acid methyl ester (C18:2 all cis-9,12 or n-
6), arachidic acid methyl ester (C20:0), gamma-linoleic acid methyl ester (C18:3 all cis-6,9,12 or n-6), cis-11-
eicosenoic acid methyl ester (C20:1 cis-11 or n-9), linolenic acid methyl ester (C18:3 all cis-9,12,15 or n-3),
heneicosanoic acid methyl ester (C21:0), cis-11,14-eicosadienoic acid methyl ester (C20:2 all cis-11,14 or n-
6), behenic acid methyl ester (C22:0), cis-8,11,14-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3 all cis-8,11,14 or n-
6 cis), erucic acid methyl ester (C22:1 cis-13 or n-9), cis-11,14,17-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3 all
cis-11,14,17 or n-3), arachidonic acid methyl ester (C20:4 all cis-5,8,11,14 or n-6), cis-13,16-docosadienoic
acid methyl ester (C22:2 all cis-13,16 or n-6), lignoceric acid methyl ester (C24:0), cis-5,8,11,14,17-
eicosapentaenoic acid methyl ester (C20:5 all cis-5,8,11,14,17 or n-3), nervonic acid methyl ester (C24:1 cis-
15 or n-9), cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid methyl ester (C22:6 all cis-4,7,10,13,16,19 or n-3).
NOTE Purchasing of individual FAME standards is more expensive than a single FAME standard mixture. In addition,
weighing each FAME standard individually couldcan give imprecision and requires high precision of weighing.
5.18.1.2 Stock solution 1 – Saturated
Into a 100 ml volumetric flask, accurately weigh to the nearest 0,1 mg about 25 mg of Lignoceric acid methyl
ester (C24:0), 25 mg of behenic acid methyl ester (C22:0), 25 mg of heneicosanoic acid methyl ester (C21:0),
25 mg of arachidic acid methyl ester (C20:0), 25 mg of acid methyl ester (C18:0), 25 mg of heptadecanoic
acid methyl ester (C17:0), 50 mg of palmitic acid methyl ester (C16:0), 25 mg of pentadecanoic acid methyl
ester (C15:0), 25 mg of myristic acid methyl ester (C14:0), 25 mg of tridecanoic acid methyl ester (C13:0),
25 mg of lauric acid methyl ester (C12:0), 25 mg of undecanoic acid methyl ester (C11:0), 25 mg of capric
acid methyl ester (C10:0), 25 mg of caprylic acid methyl ester (C8:0), 25 mg of caproic acid methyl ester
(C6:0) and 25 mg butyric acid methyl ester (C4:0). Make up to the mark with n-hexane or n-heptane.
Palmitic acid is weighed in double amount. Short chain fatty acid methyl esters (i.e. C4:0, C6:0 and C8:0) are
volatile and shall be weighed at the end of the procedure.
5.18.1.3 Stock solution 2 – Monounsaturated
Into a 100 ml volumetric flask, accurately weigh to the nearest 0,1 mg about 25 mg of nervonic acid methyl
ester (C24:1 cis-15 or n-9), 25 mg of erucic acid methyl ester (C22:1 cis-13 or n-9), 25 mg of cis-11-eicosenoic
acid methyl ester (C20:1 cis-11 or n-9), 25 mg of oleic acid methyl ester (C18:1 cis-9 or n-9), 25 mg of elaidic
acid methyl ester (C18:1 trans-9 or n-9 trans), 25 mg of cis-10-heptadecenoic acid methyl ester (C17:1 cis-
10 or n-7), 25 mg of palmitoleic acid methyl ester (C16:1 cis-9 or n-7), 25 mg of cis-10-pentadecenoic acid
methyl ester (C15:1 cis-10 or n-5) and 25 mg of myristoleic acid methyl ester (C14:1 cis-9 or n-5). Make up
to the mark with n-hexane or n-heptane.
5.18.1.4 Stock solution 3 – Polyunsaturated
Into a 100 ml volumetric flask, accurately weigh to the nearest 0,1 mg about 25 mg of Linolelaidic acid methyl
ester (C18:2 all trans-9,12 or n-6 trans), 25 mg of linoleic acid methyl ester (C18:2 all cis-9,12 or n-6), 25 mg
of gamma-linoleic acid methyl ester (C18:3 all cis-9,12 or n-6), 25 mg of linolenic acid methyl ester (C18:3
all cis-12,15 or n-3), 25 mg of cis-11,14-eicosadienoic acid methyl ester (C20:2 all cis-11,14 or n-6), 25 mg of
cis-8,11,14-eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3 all cis-8,11,14 or n-6), 25 mg of cis-11,14,17-
eicosatrienoic acid methyl ester (C20:3 all cis-11,14,17 or n-3), 25 mg of arachidonic acid methyl ester (C20:4
all cis-5,8,11,14 or n-6), 25 mg of cis-13,16-docosadienoic acid methyl ester (C22:2 cis-13,16 or n-6), 25 mg
of cis-5,8,11,14,17- eicosapentaenoic acid methyl ester (C20:5 all cis-5,8,11,14,17 or n-3) and 25 mg of cis-
4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid methyl ester (C22:6 cis-4,7,10,13,16,19 or n-3). Make up to the mark
with n-hexane or n-heptane.
5.18.1.5 Preparation of FAME standards calibration solution
Into a 100 ml volumetric flask, pipette 25,0 ml of the calibration standard stock solution 1 (5.18.1.2), 25,0 ml
of the calibration standard stock solution 2 (5.18.1.3) and 25,0 ml of the calibration standard stock solution
3 (5.18.1.4). Then make up to the mark with n-hexane or n-heptane. Dilute in accordance with the type of
injector used.
Stored in the dark at −20 °C, this solution is stable for about six months. To prevent contamination of the
standard solution, distribute the solution into different vials (ready to inject) and store them at −20 °C before
use. Use each vial once, then discard it.
NOTE A FAME standards calibration solution can be prepared by weighing each individual FAME standard according
to 5.18.1 or by using the FAME standard mixture according to 5.18.2.
5.18.2 Preparation from a quantitative FAME standard mixture
5.18.2.1 Quantitative FAME standard mixture
Purchase a quantitative FAME standard mixture: Nu-Check-Prep, Cat. Number GLC- 36 .
The FAME calibration standard mixture is carefully prepared by mass by the supplier. The mass percentage
of each component is indicated in the accompanying certificate. Each ampoule contains approximately
100 mg of the FAME calibration standard mix. All individual FAME standards are distributed in equal
proportions in the standard mixture, except for palmitic acid methyl ester (C16:0) which is added in double
amount.
5.18.2.2 Preparation of FAME standards calibration mixture
Before use, allow the ampoule to come to room temperature (maximum 25 °C) in the dark without heating.
Cut the ampoule with a glass knife, using a Pasteur pipette, rapidly transfer the content of the ampoule into
a 50 ml volumetric flask, weigh and make up to the mark with n-hexane or n-heptane. Dilute in accordance
with the type of injector used.
Stored in the dark at −20 °C, this solution is stable for about six months. To prevent contamination of the
standard solution, distribute the solution into different vials (ready to inject) and store them at −20 °C before
use. Use each vial once, then discard it.
6 Apparatus
WARNING — Since the determination involves the use of volatile flammable solvents, all electrical apparatus
employed shall comply with legislation relating to the hazards in using such solvents.
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 1 mg, with a readability of 0,1 mg.
6.2 Volumetric flasks, of capacities 50 ml, 100 ml, 250 ml, 300 ml and 500 ml.

Nu-Check-Prep GLC-36 is an example of suitable product available commercially. This information is given for the convenience of
users of this document and does not constitute an endorsement by either ISO or IDF of the product named. Equivalent products may
be used if they can be shown to lead to the same results.
6.3 Volumetric pipettes, with one mark, of capacities 2 ml, 5 ml, 10 ml, 25 ml and 50 ml, class AS
(ISO 1042).
6.4 Volumetric pipettes, with two marks, of capacities 2 ml and 5 ml, class AS (ISO 1042).
6.5 Micropipette, of capacity 200 µl.
6.6 Dispensers, of capacities 2 ml, 5 ml and 10 ml.
6.7 Test tube, of diameter 26 mm, of length 100 mm, fitted with PTFE-lined screw cap.
6.8 Test tube mixer vortex-genie, or equivalent.
6.9 Laboratory centrifuge, equipped with adapters for test tubes with external diameter of 26 mm.
6.10 Gas-liquid chromatograph, equipped with flame ionization detector and split/splitless or on-column
injector. Auto-sampler and integration system preferably computerized.
Use of the cleanest possible glassware and caps is required to avoid impurities in the FAME chromatogram.
6.10.1 Carrier gas, hydrogen or helium, purity ≥ 99,9997999 7 %.
NOTE The use of hydrogen or helium as carrier gas affects principally the chromatography duration (i.e. increase of
time between 10 min to 15 min with helium) but does not have significant impact on the chromatographic resolution
with optimized conditions.
The other gases necessary for the detector (FID) should be free from organic impurities (i.e. CnHm of below
1 ppm) and have purity at least ≥ 99,995 %. Synthetic air or compressed air can be used. The use of gas
generator is also possible.
6.10.2 Capillary column, bonded with cyanopropyl-polysiloxane phase (e.g. CP-Sil 88 Agilent) .). or
3 )
equivalent, such as poly(cyanopropyl siloxane) phase (e.g. SP-2560 Sigma-Aldrich , , brand of Merck),
(100 m length, 0,25 mm internal diameter, 0,2 micron film thickness), that elutes the FAMEs primarily by
carbon chain length and secondarily by the number of double bonds.
Traces of oxygen and humidity will damage the polar phase of the column. If pure gas is not available, use a
gas purifying filter device.
6.10.3 Flame ionization detector, capable of being heated to a temperature 50 °C above the final
temperature of the column oven.
6.10.4 Split/splitless injector, capable of being heated to a temperature 30 °C above the final temperature
of the column oven.
6.10.5 On-column injector, capable of being not heated (cold), or being heated to a temperature 30 °C
above the final temperature of the column oven.
NOTE The installation of one single injector (i.e. split/splitless or on-column) on the GC instrument is sufficient.
6.10.6 Injection syringe, capacity 10 μl.

CP-Sil 88 Agilent and SP-2560 Sigma-Aldrich are examples of suitable products available commercially. This information is given
for the convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by either ISO or IDF of the products named.
Equivalent products may be used if they can be shown to lead to the same results.
6.10.7 Integration system.
6.1110.8 Gas chromatographic conditions:
The oven temperature and the carrier gas flow depend on the column selected, and on the carrier gas used
(i.e. hydrogen or helium). In any case, the selected conditions shall produce the separation between cis and
trans zone for C18:1, C18:2, C18:3 and conjugated linoleic acids (CLA), as shown in Annex B, Figures B.1, B.2
and B.3.
The following examples in 6.11.1 and 6.11.2 list applicable conditions for a correct separation/identification
of cis and trans.:
6.11.1— Example 1 –: Split injection mode:
— Column: 100 m length, 0,25 mm internal diameter, 0,2 μm film thickness, fused silica capillary
column.
— Stationary phase: cyanopropyl-polysiloxane.
— Carrier gas type: helium.
— Column head carrier gas pressure: 225 kPa (175 kPa –to 225 kPa).
— Split flow: 25,5 ml/min.
— Split ratio: 10:1.
— Injector temperature: 250 °C.
— Detector temperature: 275 °C.
— Oven temperature programme: initial temperature of 60 °C, maintained for 5 min, raised at a rate
−1
of 15 °C min up to 165 °C, maintained at this temperature for 1 min and then raised at a rate of
−1
2 °C min up to 225 °C for 20 min.
— Amount of sample injected: 1,0 μl.
NOTE Results obtained during the collaborative study show that the use of different split ratio (i.e. from 1:10
to 1:1:100) is not affecting the results as peak response is also linked to injected FAME concentration solution.
An example of the full GC profile obtained with these conditions is shown in Annex B, Figure B.4.
6.11.2b) Example 2 –: On-column injection mode:
— Column: 100 m length, 0,25 mm internal diameter, 0,2 μm film thickness, fused silica capillary
column.
— Stationary phase: cyanopropyl-polysiloxane.
— Carrier gas type: hydrogen.
— Column head carrier gas pressure: 210 kPa (175 kPa – 225 kPa).
— Injector temperature: cold.
— Detector temperature: 275 °C.
— Oven temperature programme: initial temperature of 60 °C, maintained for 5 min, raised at a rate
−1
of 15 °C min up to 165 °C, maintained at this temperature for 1 min and then raised at a rate of
−1
2 °C min up to 225 °C for 17 min.
— Amount of sample injected: 1,0 μl.
An exampleExamples of the full GC profileprofiles obtained with thesethe conditions isgiven in examples 1
and 2 are shown in AnnexFigures B, Figure.4 and B.5, respectively.
6.1210.9 Resolution between C18:1 cis and trans:
For the accurate quantification of C18:1 TFA (level ≥ 0,5 g/100 g fat), a sufficient resolution between C18:1
trans-13/14 and C18:1 cis-9 (oleic acid) is required. The resolution is determined with the injection of the
qualitative cis and trans C18:1 FAME isomers standard mixture solution (5.17).
Inject into the gas chromatograph 1,0 µl of the calibrating solution (5.13). Determine peak width at half
height and distance between the left of the chromatogram and the top of peak for C18:1 trans-13/14 and
C18:1 cis-9 (oleic acid methyl ester). The resolution criteria R is calculated by using Formula (1):
 
 
R= 1,18×−(tt ) / W +W (1)
RR21 1 1
 
 12
 
 2 2 
where
t is the distance, in centimetres, between the left of the chromatogram and the top of peak 1 (C18:1 trans-
R1
13/14);
tR2 is the distance, in centimetres, between the left of the chromatogram and the top of peak 2 (C18:1 cis-9);
is the peak width, in centimetres, at half height of peak 1 (C18:1 trans-13/14);
W



tR1 is the distance, in centimetres, between the left of the chromatogram and the top of peak 1 (C18:1
W

 trans-13/14);
 2
tR2 is the distance, in centimetres, between the left of the chromatogram and the top of peak 2 (C18:1
cis-9);
𝑊𝑊1 is the peak width, in centimetres, at half height of peak 1 (C18:1 trans-13/14);
� �1
𝑊𝑊1 is the peak width, in centimetres, at half height of peak 2 (C18:1 cis-9).
� �2
is the peak width, in centimetres, at half height of peak 2 (C18:1 cis-9).
The resolution is sufficient when R criterion ≥ 1,00 ± 5 % (see Annex B, Figure B.3).
NOTE In casecases of insufficient resolution, but with R close to the target value, the fine tuning of chromatography
conditions (i.e. slight modification of carrier gas pressure/flow, or oven temperature programme) can give an
acceptable R value.
7 Sampling
It is important that the laboratory receives a sample that is representative and has not been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this International Standard.document. A recommended
sampling method is given in ISO 707 | IDF 50.
8 Preparation of test sample
8.1 Liquid and powder milk and infant formula with a fat content ≥ 1,5 % m/m(mass
fraction)
Bring the sample to room temperature and shake vigorously before use. Ensure that the sample is
homogeneous (i.e. mix well).
8.2 Liquid and powder milk and infant formula with a fat content < 1,5 % m/m(mass
fraction)
Bring the sample to room temperature and shake vigorously before use. Ensure that the sample is
homogeneous (i.e. mix well).
Extract the fat in accordance with ISO 14156 | IDF 172 taking care to evaporate completely the extraction
solvent(s) by heating to a temperature not higher than 40 °C to avoid the degradation of long chain
polyunsaturated fatty acids (LC-PUFA).
NOTE See also ISO 23318 | IDF 249 and ISO 8262-1 | IDF 124-1 for useful guidance on fat extraction methods.
8.3 Cheese
Bring the sample to room temperature. Ensure that the sample is homogeneous (i.e. mix well).
Extract the fat in accordance with ISO 23319 | IDF 250 taking care to remove completely the extraction
solvent by heating the fat to a temperature not higher than 60 °C.
Verify the acidity of the fat in accordance with ISO 1740 | IDF 6 (acceptance criteria ≤ 1 mmol/100 g of fat).
NOTE In the presence of methanolic sodium methoxide, free fatty acids are not converted into methyl esters (FAME).
In casecases of higher acidity (i.e. free fatty acids), these fatty acids are not quantified with the others.
9 Procedure
9.1 Test portion
Into a 25 ml centrifuge tube with a screw cap, weigh to the nearest 0,1 mg an equivalent quantity of sample
(8.1) in order to have approximately 50 mg of fat in the tube. (For example, for a sample containing 26 g fat
per 100 g from a product, the corresponding sample mass is approximately 190 mg.)
NOTE 1 For fatty acid analysis on fat extracted from foods, the same amount of fat sample is required (i.e.
approximately 50 mg).
For a powder sample, add 2,0 ml of water using a micropipette. For a liquid sample, water addition is not
required. Close the tube, then dissolve gently using a vortex mixer. Wait for 15 min at room temperature.
For the fat extracted from product (see 8.2 and 8.3),
...

PROJET FINAL
Norme
internationale
FIL 231
ISO/TC 34/SC 5
Lait, produits laitiers, formules
Secrétariat: NEN
infantiles et produits nutritionnels
Début de vote:
pour adultes — Détermination
de la composition en acides gras
Vote clos le:
— Méthode de chromatographie
en phase gazeuse sur colonne
capillaire
Milk, milk products, infant formula and adult nutritionals —
Determination of fatty acids composition — Capillary gas
chromatographic method
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT
INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSERVATIONS,
NOTIFICATION DES DROITS DE PROPRIÉTÉ DONT ILS
AURAIENT ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS
INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET COM-MERCIALES,
AINSI QUE DU POINT DE VUE DES UTILISATEURS, LES
PROJETS DE NORMES
TRAITEMENT PARALLÈLE ISO/CEN
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE CONSIDÉRÉS
DU POINT DE VUE DE LEUR POSSI BILITÉ DE DEVENIR DES
NORMES POUVANT
SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA RÉGLEMENTATION
NATIONALE.
Numéros de référence
FIL 231:2025(fr) © ISO et FIL 2025

PROJET FINAL
Norme
internationale
FIL 231
ISO/TC 34/SC 5
Lait, produits laitiers, formules
Secrétariat: NEN
infantiles et produits nutritionnels
Début de vote:
pour adultes — Détermination
de la composition en acides gras
Vote clos le:
— Méthode de chromatographie
en phase gazeuse sur colonne
capillaire
Milk, milk products, infant formula and adult nutritionals —
Determination of fatty acids composition — Capillary gas
chromatographic method
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT
INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSERVATIONS,
NOTIFICATION DES DROITS DE PROPRIÉTÉ DONT ILS
AURAIENT ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
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ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS
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être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
NORMES POUVANT
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NATIONALE.
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Numéros de référence
Publié en Suisse ISO/FDIS 16958:2025(fr)
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ii
FIL 231:2025(fr)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 6
7 Échantillonnage . 9
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 9
8.1 Lait liquide, lait en poudre et formule infantile ayant une teneur en matière
grasse ≥ 1,5 % (fraction massique) .9
8.2 Lait liquide, lait en poudre et formule infantile ayant une teneur en matière
grasse < 1,5 % (fraction massique) .9
8.3 Fromage .10
9 Mode opératoire . 10
9.1 Prise d’essai .10
9.2 Détermination quantitative .11
9.2.1 Détermination des facteurs de réponse .11
9.2.2 Détermination de la prise d’essai .11
9.2.3 Identification des acides gras .11
10 Calcul et expression des résultats .13
10.1 Calcul . 13
10.1.1 Calcul du facteur de réponse . 13
10.1.2 Acides gras dans le produit . 13
10.1.3 Acides gras dans la matière grasse totale .14
10.1.4 Somme de la classe ou du groupe d’acides gras dans 100 g de produit .14
10.1.5 Somme de la classe ou du groupe d’acides gras dans 100 g de matière grasse .14
10.1.6 Performance de la transestérification .14
10.2 Expression des résultats . . 15
11 Fidélité .15
11.1 Essai interlaboratoires . 15
11.2 Répétabilité . 15
11.3 Reproductibilité . .16
11.4 Limite de détection (LDD) .16
11.5 Limite de quantification (LOQ) .16
12 Rapport d’essai .16
Annexe A (normative) Groupes ou classes d’acides gras et acides gras individuels . 17
Annexe B (normative) Analyse par chromatographie en phase liquide .21
Annexe C (informative) Résultats d’un essai interlaboratoires .30
Bibliographie .56

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iii
FIL 231:2025(fr)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié de tels droits de
propriété et averti de leur existence.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration
avec AOAC INTERNATIONA, et en collaboration avec le Comité européen de normalisation (CEN), comité
technique CEN/TC 302, Lait et produits laitiers — Méthodes d’échantillonnage et d’analyse, conformément à
l’accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne). Elle est publiée conjointement
par l’ISO et la FIL, et séparément, par l’AOAC INTERNATIONAL. La méthode décrite dans la présente Norme
internationale est l’équivalent de la méthode officielle de l’AOAC 2012.13: Détermination de la teneur en
acides gras déclarés dans les produits laitiers et les formules infantiles.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 16958 | IDF 231:2015), dont elle
constitue une révision mineure.
Les modifications sont les suivantes:
— mise à jour de références aux autres normes;
— les informations sur les solutions étalons et les colonnes chromatographiques ont été mises à jour;
— la Bibliographie a été étendue.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente les
intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont organisés
en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de groupes d’intérêt
nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des acteurs de l’industrie

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iv
FIL 231:2025(fr)
de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des universitaires et des
représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.
L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes
d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient
conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux
organisations.
L’IDF attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’IDF ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’IDF n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. L’IDF ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié de tels droits de
propriété et averti de leur existence.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Le présent document a été élaboré par le comité permanent de la FIL chargé des Méthodes d’analyse pour la
composition et par le comité technique de l’ISO, l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et
produits laitiers (SC 5), en collaboration avec l’AOAC INTERNATIONAL. Elle est publiée conjointement par
l’ISO et la FIL, et séparément, par l’AOAC INTERNATIONAL. La méthode décrite dans la présente Norme
internationale est l’équivalent de la méthode officielle de l’AOAC 2012.13: Détermination de la teneur en acides
gras déclarés dans les produits laitiers et les formules infantiles.
L’ensemble des travaux a été confié à l’équipe d’action mixte ISO/FIL C11 du comité permanent chargé des
Méthodes d’analyse pour la composition, sous la conduite de son chef de projet, M. Pierre-Alain Golay (CH).

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v
PROJET FINAL Norme internationale
FIL 231:2025(fr)
Lait, produits laitiers, formules infantiles et produits
nutritionnels pour adultes — Détermination de la
composition en acides gras — Méthode de chromatographie
en phase gazeuse sur colonne capillaire
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de quantification des teneurs en acides gras individuels et/ou
des teneurs en tous les acides gras dans le profil du lait, des produits laitiers, des formules infantiles et des
préparations nutritionnelles pour adultes contenant de la matière grasse de lait et/ou des huiles végétales,
supplémentées ou non supplémentées avec des huiles riches en acides gras polyinsaturés à chaîne longue
(AGPI-CL). Cela inclut également les groupes d’acides gras souvent déclarés [c’est-à-dire, les acides gras trans
(AGT), les acides gras saturés (AGS), les acides gras monoinsaturés (AGMI), les acides gras polyinsaturés
(AGPI), les acides gras oméga-3, oméga-6 et oméga-9] et/ou les acides gras individuels [c’est-à-dire l’acide
linoléique (AL), l’acide α-linolénique (AAL), l’acide arachidonique (ARA), l’acide éicosapentaénoïque (AEP),
l’acide docosahexaénoïque (ADH)].
La détermination est effectuée par transestérification directe dans les matrices d’aliments, sans extraction
préalable de la matière grasse. Elle s’applique donc aux échantillons liquides ou aux échantillons pulvérulents
reconstitués avec de l’eau et ayant une teneur totale en matière grasse supérieure ou égale à 1,5 % (fraction
massique).
La matière grasse extraite de produits contenant moins de 1,5 % (fraction massique) de matière grasse peut
être analysée avec la même méthode après une extraction préalable de la matière grasse en utilisant les
méthodes référencées à l’Article 2. Les produits laitiers, tels que les fromages à pâte molle ou à pâte dure
ayant un niveau d’acidité inférieur ou égal à 1 mmol/100 g de matière grasse, peuvent être analysés après
une extraction préalable de la matière grasse en utilisant les méthodes référencées à l’Article 2.
Pour les produits supplémentés ou enrichis en AGPI extrait d’huile de poisson ou d’algues, l’évaporation de
solvants est effectuée à la plus faible température possible (par exemple, 40 °C maximum) pour récupérer
ces acides gras sensibles.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour
les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait
ISO 1740, | IDF 6, Produits à matière grasse laitière et beurre — Détermination de l'acidité de la matière grasse
(Méthode de référence)
ISO 14156, | IDF 172, Lait et produits laitiers — Méthodes d’extraction des lipides et des composés liposolubles
ISO 23319, | IDF 250, Fromages et fromages fondus, caséines et caséinates — Détermination de la teneur en
matière grasse — Méthode gravimétrique
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.

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FIL 231:2025(fr)
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en normalisation,
consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
teneur en acides gras
fraction massique d’une ou plusieurs substances
Note 1 à l'article: La teneur en acides gras est déterminée par le mode opératoire spécifié dans le présent document.
Voir Tableau A.1.
Note 2 à l'article: La teneur en acides gras est exprimée sous forme de fraction massique en grammes (ou en
milligrammes) des acides gras pour 100 g de produit. Les résultats des acides gras peuvent être convertis dans
d’autres formats d’expression des résultats (voir 10.2).
4 Principe
Ajout de la solution étalon interne à l’échantillon, préparation des esters méthyliques d’acides gras (EMAG)
par transestérification directe avec du méthoxyde de sodium méthanolique pour les échantillons liquides;
dissolution (c’est-à-dire, reconstitution) dans l’eau pour les échantillons pulvérulents et transestérification
directe avec du méthoxyde de sodium méthanolique. Le même mode opératoire de transestérification est
utilisé pour la matière grasse extraite de divers aliments (par exemple, produits pauvres en matière grasse,
fromages).
La séparation des EMAG est effectuée par chromatographie gaz-liquide sur colonne capillaire. L’identification
des EMAG est effectuée par comparaison avec le temps de rétention des étalons purs et quantification en
tant qu’acides gras en référence à un étalon interne (EMAG C11:0) et aux facteurs de réponse de l’instrument.
Vérification de la performance de transestérification à l’aide d’un deuxième étalon interne (TAG C13:0).
5 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.1 n-hexane, [CH (CH ) CH ], qualité pour chromatographie ou n-heptane, [CH (CH ) CH ], qualité pour
3 2 4 3 3 2 5 3
chromatographie.
5.2 Méthanol, [CH OH], qualité pour chromatographie.
5.3 Eau, qualité pour CLHP ou de pureté équivalente.
5.4 Solution de méthoxyde de sodium [CH ONa], dissoute dans du méthanol à 30 % m/v ou 25 % m/v,
selon la disponibilité locale.
5.5 Solution de transestérification (solution de méthoxyde de sodium à 5 % dans du méthanol).
Dans une fiole jaugée de 250 ml, introduire à la pipette 42 ml (ou 50 ml) de solution de méthoxyde de
sodium à 30 % m/v (ou 25 % m/v) et mélanger doucement avec 200 ml de méthanol en utilisant un agitateur
magnétique. Retirer l’agitateur magnétique (c’est-à-dire à l’aide d’une tige rigide dotée d’une extrémité
magnétique), puis refroidir à température ambiante et compléter jusqu’au trait avec du méthanol.
Cette solution est stable pendant une semaine si elle est conservée à l’abri de la lumière et à 4 °C. Laisser
la solution s’équilibrer à température ambiante avant utilisation. Ce volume de solution permet d’analyser
environ 40 échantillons. S’il y a moins d’analyses, le volume de réactif peut être adapté en conséquence.

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Effectuer la réaction de transestérification à température ambiante (entre 20 °C et 25 °C).
NOTE La valeur indiquée entre parenthèses () correspond à la solution de méthoxyde de sodium à 25 % m/v.
5.6 Hydrogénocitrate de disodium sesquihydraté, [HOC(COOH)(CH COONa) .1,5 H O].
2 2 2
5.7 Chlorure de sodium, [NaCl].
5.8 Solution de neutralisation (hydrogénocitrate de disodium sesquihydraté à 10 %, chlorure de sodium
à 15 % m/v dans l’eau).
Peser 50,0 g d’hydrogénocitrate de disodium sesquihydraté et 75,0 g de chlorure de sodium dans une fiole
jaugée de 500 ml. Dissoudre dans 450 ml d’eau en utilisant un agitateur magnétique. Retirer l’agitateur
magnétique puis compléter jusqu’au trait avec de l’eau.
Cette solution est stable pendant un mois si elle est conservée à l’abri de la lumière et à 4 °C. La présence de
cristaux de sel peut apparaître dans la solution pendant le stockage, mais disparaître après agitation.
Laisser la solution s’équilibrer à température ambiante avant utilisation. Ce volume de solution permet
d’analyser environ 40 échantillons ou plus. S’il y a moins d’analyses (ou une seule analyse), la masse et le
volume de solution peuvent être adaptés en conséquence.
5.9 Éther méthylique de tert-butyle (MTBE), qualité pour chromatographie.
5.10 Undécanoate de méthyle (EMAG C11:0), de pureté ≥ 99 %, en fraction massique.
5.11 Tritridécanoïne (TAG C13:0), de pureté ≥ 99 %, en fraction massique.
5.12 Solution étalon d’EMAG C11:0/TAG C13:0
Dans une fiole jaugée de 250 ml, peser, à 0,1 mg près, environ 500 mg de tritridécanoïne et 500 mg
d’undécanoate de méthyle. Dissoudre et compléter au volume avec du MTBE.
Cette solution est stable pendant une semaine si elle est conservée à l’abri de la lumière et à 4 °C. Laisser la
solution s’équilibrer à température ambiante avant utilisation.
Ce volume de solution permet d’analyser environ 40 échantillons ou plus. S’il y a moins d’analyses, la masse
et le volume de solvant peuvent être adaptés en conséquence.
5.13 Esters méthyliques d’acide octadécènoïque, mélange d’isomères cis et trans de C18:1 avec des
isomères trans-4 à trans-16 d’acide octadécènoïque (tous les isomères) et des isomères cis principaux
(concentration de 2,5 mg/ml dans du chlorure de méthylène).
NOTE La présente norme est disponible sur le marché auprès de Sigma-Aldrich, marque de Merck (Cat. 40495-U),
1)
ou Cayman Chemical (cat. 29363).
5.14 Esters méthyliques d’acide linoléique, mélange d’isomères cis et trans de C18:2 avec de l’acide trans-
9,trans-12-octadécadiénoïque (~ 50 %), de l’acide cis-9,trans-12-octadécadiénoïque (~ 20 %), de l’acide trans-
9,cis-12-octadécadiénoïque (~ 20 %) et de l’acide cis-9,cis-12-octadécadiénoïque (~ 10 %). Concentration de
10 mg/ml dans du chlorure de méthylène.
1)
NOTE La présente norme est disponible sur le marché auprès de Sigma-Aldrich, marque de Merck (Cat. L8404) .
1) Sigma-Aldrich, marque de Merck, et Cayman Chemical sont des exemples de produits appropriés disponibles dans
le commerce. Cette information est donnée par souci de commodité à l’intention des utilisateurs de la présente Norme
internationale et ne saurait constituer un engagement de l’ISO ou de la FIL à l’égard de ces produits. Des produits
équivalents peuvent être utilisés s’il est démontré qu’ils aboutissent aux mêmes résultats.

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5.15 Esters méthyliques d’acide linolénique, mélange d’isomères cis et trans de C18:3 avec
— de l’ester méthylique d’acide cis-9,cis-12,cis-15-octadécatriénoïque (~ 3 % (fraction massique)),
— de l’ester méthylique d’acide cis-9,cis-12,trans-15-octadécatriénoïque (~ 7 % (fraction massique)),
— de l’ester méthylique d’acide cis-9,trans-12,cis-15-octadécatriénoïque (~ 7 % (fraction massique)),
— de l’ester méthylique d’acide cis-9,trans-12,trans-15-octadécatriénoïque (~ 15 % (fraction massique)),
— de l’ester méthylique d’acide trans-9,cis-12,cis-15-octadécatriénoïque (~ 7 % (fraction massique)),
— de l’ester méthylique d’acide trans-9,cis-12,trans-15-octadécatriénoïque (~ 15 % (fraction massique)),
— de l’ester méthylique d’acide trans-9,trans-12,cis-15-octadécatriénoïque (~ 15 % (fraction massique)),
— de l’ester méthylique d’acide trans-9,trans-12,trans-15-octadécatriénoïque (~ 30 % (fraction massique)).
Concentration de 10 mg/ml dans du chlorure de méthylène.
1)
NOTE La présente norme est disponible sur le marché auprès de Sigma-Aldrich, marque de Merck (Cat. L6031) .
Cet étalon contient tous les isomères trans de C18:3 (huit au total), mais leur abondance et leur rapport sont différents
de ceux observés dans les corps gras raffinés/désodorisés.
5.16 Acides conjugués d’octadécadiénoate de méthyle, mélange d’acides conjugués de C18:2 cis-
9,trans-11 et de cis-10,trans-12-octadécadiénoate), de pureté ≥ 99 %, en fraction massique.
1)
NOTE La présente norme est disponible sur le marché auprès de Sigma-Aldrich, marque de Merck (Cat. O5507) .
La présente norme contient les deux principaux isomères d’ALC, mais le rapport des isomères peut varier d’un lot à
l’autre.
5.17 Solution qualitative de mélange étalon d’isomères cis et trans
Pour l’identification du temps de rétention (RT) des isomères cis et trans (c’est-à-dire, C18:1, C18:2, C18:3
et ALC), préparer une solution étalon qualitative avec les étalons indiqués de 5.13 à 5.16. Tous les étalons
disponibles dans le commerce peuvent être utilisés. Dans une fiole jaugée de 50 ml, ajouter chaque solution
étalon d’isomère en proportion égale. Dissoudre et compléter jusqu’au trait avec du n-hexane ou du
n-heptane. Diluer en fonction du type d’injecteur utilisé.
5.18 Solution d’étalons d’EMAG pour étalonnage
5.18.1 Préparation avec des étalons EMAG individuels
5.18.1.1 Étalons EMAG individuels
Acheter les étalons EMAG individuels suivants (pureté ≥ 99 %):
Ester méthylique d’acide butyrique (C4:0), ester méthylique d’acide caproïque (C6:0), ester méthylique
d’acide caprylique (C8:0), ester méthylique d’acide caprique (C10:0), ester méthylique d’acide undécanoïque
(C11:0), ester méthylique d’acide laurique (C12:0), ester méthylique d’acide tridécanoïque (C13:0), ester
méthylique d’acide myristique (C14:0), ester méthylique d’acide myristoléique (C14:1 cis-9 ou n-5), ester
méthylique d’acide pentadécanoïque (C15:0), ester méthylique d’acide cis-10-pentadécènoïque (C15:1 cis-10
n-5), ester méthylique d’acide palmitique (C16:0), ester méthylique d’acide palmitoléique (C16:1 cis-9 ou n-7),
ester méthylique d’acide heptadécanoïque (C17:0), ester méthylique d’acide cis-10-heptadécènoïque (C17:1
cis-10 ou n-7), ester méthylique d’acide stéarique (C18:0), ester méthylique d’acide élaïdique (C18:1 trans-9
ou n-9), ester méthylique d’acide oléique (C18:1 cis-9 ou n-9), ester méthylique d’acide linolélaïdique (C18:2
tout trans-9,12 ou n-6), ester méthylique d’acide linoléique (C18:2 tout cis-9,12 ou n-6), ester méthylique
d’acide arachidique (C20:0), ester méthylique d’acide gamma-linoléique (C18:3 tout cis-6,9,12 ou n-6), ester
méthylique d’acide cis-11-éicosénoïque (C20:1 cis-11 ou n-9), ester méthylique d’acide linolénique (C18:3 tout
cis-9,12,15 ou n-3), ester méthylique d’acide hénéicosanoïque (C21:0), ester méthylique d’acide cis-11,14-
éicosadiénoïque (C20:2 tout cis-11,14 ou n-6), ester méthylique d’acide béhénique (C22:0), ester méthylique

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d’acide cis-8,11,14-éicosatriénoïque (C20:3 tout cis-8,11,14 ou n-6 cis), ester méthylique d’acide érucique
(C22:1 cis-13 ou n-9), ester méthylique d’acide cis-11,14,17-éicosatriénoïque (C20:3 tout cis-11,14,17 ou
n-3), ester méthylique d’acide arachidonique (C20:4 tout cis-5,8,11,14 ou n-6), ester méthylique d’acide cis-
13,16-docosadiénoïque (C22:2 tout cis-13,16 ou n-6), ester méthylique d’acide lignocérique (C24:0), ester
méthylique d’acide cis-5,8,11,14,17-éicosapentaénoïque (C20:5 tout cis-5,8,11,14,17 ou n-3), ester méthylique
d’acide nervonique (C24:1 cis-15 ou n-9), ester méthylique d’acide cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaénoïque
(C22:6 tout cis-4,7,10,13,16,19 ou n-3).
NOTE Il revient plus cher d’acheter des étalons EMAG individuels qu’un seul mélange étalon d’EMAG. De plus, le
fait de peser chaque étalon EMAG individuellement peut engendrer des imprécisions et nécessite une haute précision
de pesée.
5.18.1.2 Solution mère 1 — Saturée
Dans une fiole jaugée de 100 ml, peser à 0,1 mg près, environ 25 mg d’ester méthylique d’acide
lignocérique (C24:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide béhénique (C22:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide
hénéicosanoïque (C21:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide arachidique (C20:0), 25 mg d’ester méthylique
d’acide stéarique (C18:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide heptadécanoïque (C17:0), 50 mg d’ester
méthylique d’acide palmitique (C16:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide pentadécanoïque (C15:0), 25 mg
d’ester méthylique d’acide myristique (C14:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide tridécanoïque (C13:0),
25 mg d’ester méthylique d’acide laurique (C12:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide undécanoïque (C11:0),
25 mg d’ester méthylique d’acide caprique (C10:0), 25 mg d’ester méthylique d’acide caprylique (C8:0), 25 mg
d’ester méthylique d’acide caproïque (C6:0) et 25 mg d’ester méthylique d’acide butyrique (C4:0). Compléter
jusqu’au trait avec du n-hexane ou du n-heptane.
L’acide palmitique est pesé en double quantité. Les esters méthyliques d’acides gras à chaîne courte (c’est-à-
dire, C4:0, C6:0 et C8:0) sont volatils et doivent être pesés à la fin du mode opératoire.
5.18.1.3 Solution mère 2 — Monoinsaturée
Dans une fiole jaugée de 100 ml, peser à 0,1 mg près, environ 25 mg d’ester méthylique d’acide nervonique
(C24:1 cis-15 ou n-9), 25 mg d’ester méthylique d’acide érucique (C22:1 cis-13 ou n-9), 25 mg d’ester méthylique
d’acide cis-11-éicosénoïque (C20:1 cis-11 ou n-9), 25 mg d’ester méthylique d’acide oléique (C18:1 cis-9 ou n-9),
25 mg d’ester méthylique d’acide élaïdique (C18:1 trans-9 ou n-9 trans), 25 mg d’ester méthylique d’acide cis-
10-heptadécènoïque (C17:1 cis-10 ou n-7), 25 mg d’ester méthylique d’acide palmitoléique (C16:1 cis-9 ou n-7),
25 mg d’ester méthylique d’acide cis-10-pentadécènoïque (C15:1 cis-10 ou n-5) et 25 mg d’ester méthylique
d’acide myristoléique (C14:1 cis-9 ou n-5). Compléter jusqu’au trait avec du n-hexane ou du n-heptane.
5.18.1.4 Solution mère 3 — Polyinsaturée
Dans une fiole jaugée de 100 ml, peser à 0,1 mg près, environ 25 mg d’ester méthylique d’acide linolélaïdique
(C18:2 tout trans-9,12 ou n-6 trans), 25 mg d’ester méthylique d’acide linoléique (C18:2 tout cis-9,12 ou n-6),
25 mg d’ester méthylique d’acide gamma-linoléique (C18:3 tout cis-9,12 ou n-6), 25 mg d’ester méthylique
d’acide linolénique (C18:3 tout cis-12,15 ou n-3), 25 mg d’ester méthylique d’acide cis-11,14-éicosadiénoïque
(C20:2 tout cis-11,14 ou n-6), 25 mg d’ester méthylique d’acide cis-8,11,14-éicosatriénoïque (C20:3 tout
cis-8,11,14 ou n-6), 25 mg d’ester méthylique d’acide cis-11,14,17-éicosatriénoïque (C20:3 tout cis-11,14,17
ou n-3), 25 mg d’ester méthylique d’acide arachidonique (C20:4 tout cis-5,8,11,14 ou n-6), 25 mg d’ester
méthylique d’acide cis-13,16-docosadiénoïque (C22:2 cis-13,16 ou n-6), 25 mg d’ester méthylique d’acide
cis-5,8,11,14,17-éicosapentaénoïque (C20:5 tout cis-5,8,11,14,17 ou n-3) et 25 mg d’ester méthylique d’acide
cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaénoïque (C22:6 cis-4,7,10,13,16,19 ou n-3). Compléter jusqu’au trait avec du
n-hexane ou du n-heptane.
5.18.1.5 Préparation des solutions d’étalonnage EMAG
Dans une fiole jaugée de 100 ml, introduire à la pipette 25,0 ml de solution mère étalon 1 (5.18.1.2), 25,0 ml de
solution mère étalon 2 (5.18.1.3) et 25,0 ml de solution mère étalon 3 (5.18.1.4). Compléter ensuite jusqu’au
trait avec du n-hexane ou du n-heptane. Diluer en fonction du type d’injecteur utilisé.

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Cette solution est stable pendant environ six mois si elle est conservée à l’abri de la lumière et à −20 °C. Pour
empêcher toute contamination de la solution étalon, la répartir dans différents flacons (prêts à l’injection) et
conserver ces flacons à −20 °C avant de les utiliser. Utiliser chaque flacon une fois puis le jeter.
NOTE Une solution d’étalons FAME peut être préparée en pesant chaque étalon FAME individuel conformément à
5.18.1 ou en utilisant le mélange d’étalons FAME conformément à 5.18.2.
5.18.2 Préparation à partir d’un mélange quantitatif d’étalons EMAG
5.18.2.1 Mélange quantitatif d’étalons EMAG
2)
Acheter un mélange quantitatif d’étalons EMAG: Nu-Check-Prep, Cat. réf GLC- 36 .
Le mélange étalon d’EMAG est soigneusement préparé en masse par le fabricant. Le pourcentage en masse de
chaque composant est indiqué dans le certificat joint. Chaque ampoule contient environ 100 mg du mélange
étalon d’EMAG. Tous les étalons EMAG individuels sont répartis en proportions égales dans le mélange
étalon, excepté l’ester méthylique d’acide palmitique (C16:0) qui est ajouté en double quantité.
5.18.2.2 Préparation du mélange étalon EMAG
Avant utilisation, laisser l’ampoule s’équilibrer à température ambiante (25 °C maximum) à l’abri de la
lumière sans la chauffer. Couper l’ampoule avec un couteau en verre et, à l’aide d’une pipette Pasteur,
transférer rapidement son contenu dans une fiole jaugée de 50 ml, peser et compléter jusqu’au trait avec du
n-hexane ou du n-heptane. Diluer en fonction du type d’injecteur utilisé.
Cette solution est stable pendant environ six mois si elle est conservée à l’abri de la lumière et à −20 °C. Pour
empêcher toute contamination de la solution étalon, la répartir dans différents flacons (prêts à l’injection) et
conserver ces flacons à −20 °C avant de les utiliser. Utiliser chaque flacon une fois puis le jeter.
6 Appareillage
AVERTISSEMENT — Étant donné que la détermination implique l’utilisation de solvants inflammables
volatils, l’ensemble des appareils électriques doit être conforme à la législation relative aux dangers
liés à l’utilisation de ces solvants.
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Balance analytique, précise à 1 mg près, avec une lisibilité de 0,1 mg.
6.2 Fioles jaugées, ayant des capacités de 50 ml, 100 ml, 250 ml, 300 ml et 500 ml.
6.3 Pipettes volumétriques à un trait, ayant des capacités de 2 ml, 5 ml, 10 ml, 25 ml et 50 ml, de classe
AS (ISO 1042).
6.4 Pipettes volumétriques à deux traits, ayant des capacités de 2 ml et 5 ml, de classe AS (ISO 1042).
6.5 Micropipette, d’une capacité de 200 µl.
6.6 Distributeurs, ayant des capacités de 2 ml, 5 ml et 10 ml.
6.7 Tube à essai, de 26 mm de diamètre, de 100 mm de longueur, équipé d’un bouchon à vis garni de PTFE.
2) Nu-Check-Prep GLC-36 est un exemple de produit approprié disponible dans le commerce. Cette information est
donnée par souci de commodité à l'intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne saurait constituer
un engagement de l’ISO ou de la FIL à l’égard de ce produit. Des produits équivalents peuvent être utilisés s’il est démontré
qu’ils aboutissent aux mêmes résultats.

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6.8 Agitateur Vortex-Genie pour tubes à essai, ou équivalent.
6.9 Centrifugeuse de laboratoire, équipée d’adaptateurs pour tubes à essai d’un diamètre extérieur
de 26 mm.
6.10 Chromatographe gaz-liquide, équipé d’un détecteur à ionisation de flamme et d’un injecteur à
débit divisé/non divisé ou d’un injecteur en tête de colonne. L’échantillonneur automatique et le système
d’intégration sont de préférence informatisés.
Il est nécessaire d’utiliser la verrerie et les bouchons les plus propres possible pour éviter la présence
d’impuretés dans le chromatogramme EMAG.
6.10.1 Gaz vecteur, hydrogène ou hélium, pureté ≥ 99,999 7 %.
NOTE L’utilisation d’hydrogène ou d’hélium comme gaz vecteur affecte principalement la durée de la
chromatographie (soit une augmentation de 10 min à 15 min avec l’hélium) et n’a aucun impact significatif sur la
résolution chromatographique avec des conditions optimisées.
Il convient que les autres gaz nécessaires pour le détecteur (FID) soient exempts d’impuretés organiques
(par exemple CnHm à moins de 1 ppm) et soient d’une pureté au moins supérieure ou égale à 99,995 %. De
l’air synthétique ou de l’air comprimé peut être utilisé. L’utilisation d’un générateur de gaz est également
possible.
3)
6.10.2 Colonne capillaire, liée à une phase cyanopropyl-polysiloxane (par exemple CP-Sil 88 Agilent ) ou
3)
équivalente, telle que la phase poly(cyanopropyl siloxane) (par exemple SP-2560 Sigma-Aldrich , marque
de Merck), (100 m de longueur, 0,25 mm de diamètre intérieur, 0,2 micron d’épaisseur de film), qui élue les
EMAG principalement par la longueur de la chaîne carbonée et secondairement par le nombre de liaisons
doubles.
Toute trace d’oxygène et d’humidité endommagera la phase polaire de la colonne. Si aucun gaz pur n’est
disponible, utiliser un filtre de purification des gaz.
6.10.3 Détecteur à ionisation de flamme, pouvant être chauffé à une température de 50 °C de plus que la
température finale du four de la colonne.
6.10.4 Injecteur à débit divisé/non divisé, pouvant être chauffé à une température de 30 °C de plus que la
température finale du four de la colonne.
6.10.5 Injecteur en tête de colonne, capable de ne pas être chauffé (froid) ou d’être chauffé à une
température de 30 °C de plus que la température finale du four de la colonne.
NOTE Il est possible d’installer un seul injecteur (c’est-à-dire, à débit divisé/non divisé ou en tête de colonne) sur
l’instrument CG.
6.10.6 Seringue d’injection, d’une capacité de 10 μl.
6.10.7 Système d’intégration.
6.10.8 Conditions de chromatographie en phase gazeuse:
La température du four et l’écoulement du gaz vecteur dépendent du choix de la colonne ainsi que du gaz
vecteur employé (c’est-à-dire, hydrogène ou hélium). Dans tous les cas, les conditions choisies doivent
3) CP-Sil 88 Agilent et SP-2560 Sigma-Aldrich sont des exemples de produits appropriés disponibles dans le commerce.
Cette information est donnée par souci de commodité à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale
et ne saurait constituer un engagement de l’ISO ou de la FIL à l’égard de ces produits. Des produits équivalents peuvent
être utilisés s’il est démontré qu’ils aboutissent aux mêmes résultats.

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provoquer la séparation entre la zone cis et trans pour le C18:1, le C18:2, le C18:3 et les acides linoléiques
conjugués (ALC), comme illustré aux Figures B.1, B.2 et B.3).
Les exemples suivants répertorient les conditions applicables pour une séparation/identification correcte
des isomères cis et trans.
— Exemple 1: mode d’injection à débit divisé:
— colonne: 100 m de longueur, 0,25 mm de diamètre intérieur, 0,2 μm d’épaisseur de film, colonne
capillaire en silice fondue;
— phase stationnaire: cyanopropyl-polysiloxane;
— type de gaz vecteur: hélium;
— pression du gaz vecteur en tête de colonne: 225 kPa (175 kPa à 225 kPa);
— débit de division: 25,5 ml/min;
— rapport de division: 10:1;
— température de l’injecteur: 250 °C;
— température du détecteur: 275 °C;
— programme de températures du four: température initiale de 60 °C, maintenue pendant 5 min,
−1
augmentée à un débit de 15 °C min jusqu’à 165 °C, maintenue à cette température pendant 1 min
−1
puis augmentée à un débit de 2 °C min jusqu’à 225 °C pendant 20 min;
— quantité d’échantillon injectée: 1,0 μl.
NOTE Les résultats obte
...