ISO 6785:2001
(Main)Milk and milk products — Detection of Salmonella spp.
Milk and milk products — Detection of Salmonella spp.
ISO 6785|IDF 93:2001 specifies a method for the detection of Salmonella spp. in milk and milk products.
Lait et produits laitiers — Recherche de Salmonella spp.
L'ISO 6785|FIL 93:2001 spécifie une méthode pour la recherche de Salmonella spp. dans le lait et les produits laitiers.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 6785
IDF
Second edition
2001-05-15
Milk and milk products — Detection of
Salmonella spp.
Lait et produits laitiers — Recherche de Salmonella spp.
Reference numbers
IDF 93:2001(E)
©
ISO and IDF 2001
IDF 93:2001(E)
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Printed in Switzerland
ii © ISO and IDF 2001 – All rights reserved
IDF 93:2001(E)
Contents Page
1 Scope . 1
2 Normative reference . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
4.1 General . 1
4.2 Pre-enrichment in non-selective liquid medium . 1
4.3 Enrichment in selective liquid media . 1
4.4 Streaking out and recognition . 2
4.5 Confirmation . 2
5 Culture media, reagents and sera . 2
6 Apparatus and glassware . 12
7 Sampling . 13
8 Preparation of test sample . 13
9 Procedure . 13
9.1 Safety precautions . 13
9.2 Test portion and pre-enrichment . 13
9.3 Enrichment . 14
9.4 Streaking out and recognition . 14
9.5 Confirmation . 15
10 Control cultures . 18
11 Expression of results . 18
12 Safety precautions . 18
13 Test report . 19
Annexes
A Diagram of procedure . 20
B Specification for brilliant green. 21
C Standard method for streaking agar plates. 22
Bibliography. 23
iii
IDF 93:2001(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this International Standard may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
International Standard ISO 6785�IDF 93 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with
AOAC International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 6785:1985), which has been technically revised.
Annexes A and B form a normative part of this International Standard. Annex C is for information only.
iv
IDF 93:2001(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National Committee in
every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF Standing Committees
carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO and AOAC International in the development of standard
methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the National
Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of National
Committees casting a vote.
International Standard ISO 6785�IDF 93 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with
AOAC International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
All work was carried out by the Joint ISO/IDF/AOAC Action Team on Harmonization, of the Standing Committee on
Microbial methods of analysis, under the aegis of its project leader, Mr. H. Becker (DE).
This fourth edition cancels and replaces the third edition (IDF 93:1995).
v
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 93:2001(E)
Milk and milk products — Detection of Salmonella spp.
1 Scope
This International Standard specifies a method for the detection of Salmonella spp. in milk and milk products.
2 Normative reference
The following normative document contains provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these
publications do not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent edition of the normative document indicated below. For undated
references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC maintain
registers of currently valid International Standards.
ISO 8261�IDF 122, Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples, initial suspensions
and decimal dilutions for microbiological examination.
3 Terms and definitions
For the purposes of this International Standard, the following terms and definitions apply.
3.1
Salmonella
microorganisms which form typical colonies on solid selective media and which display the biochemical and
serological characteristics described when tests are carried out in accordance with this International Standard
3.2
detection of Salmonella
detection of the presence or absence of these microorganisms, in a particular mass or volume, when tests are
carried out in accordance with this International Standard
4 Principle
4.1 General
The detection of Salmonella necessitates four successive stages (see annex A).
4.2 Pre-enrichment in non-selective liquid medium
�
Inoculation of the pre-enrichment medium with the test portion, and incubation at 37 C for 16 h to 20 h.
4.3 Enrichment in selective liquid media
Inoculation of Rappaport-Vassiliadis modified magnesium chloride/malachite green medium and of selenite/cystine
medium with the culture obtained in 4.2.
IDF 93:2001(E)
Incubation of the Rappaport-Vassiliadis modified magnesium chloride/malachite green medium in the water bath or
�
incubator (6.4) set at 41,5 C for 24 h and then a further 24 h.
�
Incubation of the selenite/cystine medium in the incubator (6.3) set at 37 C for 24 h and then a further 24 h.
4.4 Streaking out and recognition
From the cultures obtained (4.3), inoculation of two selective solid media (brilliant green/phenol red agar and any
other suitable solid selective medium).
NOTE Suitable media allow the recovery of lactose-fermenting Salmonella strains.
�
Incubation of the brilliant green/phenol red agar in the incubator (6.3) set at 37 C and examination after 20 h to 24 h
and, if necessary, again after 40 h to 48 h to check the presence of colonies which, from their characteristics, are
considered to be presumptive Salmonella.
Incubation of the second selective solid medium at the appropriate temperature and examination after the
appropriate time to check the presence of colonies which, from their characteristics, are considered to be
presumptive Salmonella.
4.5 Confirmation
Subculturing of colonies of presumptive Salmonella (4.4) and confirmation by means of appropriate biochemical and
serological tests.
5 Culture media, reagents and sera
In order to improve the reproducibility of the results, it is recommended that, for the preparation of culture media,
dehydrated basic components or dehydrated complete media are used. In that case, follow the manufacturer's
instructions rigorously.
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.
�
The pH values given refer to a temperature of 25 C. Adjustments, if necessary, are made by adding either
hydrochloric acid [c (HCl)= 1 mol/l] or sodium hydroxide solution [c (NaOH)= 1 mol/l].
If not used immediately, store the prepared culture media and reagents under conditions that do not produce any
� �
change in their composition, in the dark at a temperature between 0 C and + 5 C, for no longer than 1 month,
unless otherwise stated.
5.1 Water
Use distilled or demineralized water or water of equivalent purity. The water shall be free from substances that might
inhibit the growth of microorganisms under the test conditions specified in this International Standard.
IDF 93:2001(E)
5.2 Culture media
5.2.1 Pre-enrichment medium: Buffered peptone water
5.2.1.1 Composition
Peptone 10,0 g
Sodium chloride (NaCl) 5,0 g
Disodium hydrogen phosphate dodecahydrate
(Na HPO ·12H O) 9,0 g
2 4 2
Potassium dihydrogen phosphate (KH PO ) 1,5 g
2 4
Water 1 000 ml
5.2.1.2 Preparation
7,0� 0,1
Dissolve the components in the water by heating. Adjust the pH so that after sterilization it is .
Transfer the medium in quantities of 225 ml into flasks (6.9) of capacity 500 ml (or multiples of 225 ml into flasks of
�
suitable capacity). Sterilize in the autoclave (6.1) set at 121 C for 15 min. Cool to room temperature.
5.2.2 First selective enrichment medium: Rappaport-Vassiliadis modified magnesium chloride/malachite
green medium (RVS broth)
5.2.2.1 Solutio
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 6785
FIL
Deuxième édition
2001-05-15
Lait et produits laitiers — Recherche de
Salmonella spp.
Milk and milk products — Detection of Salmonella spp.
Numéros de référence
FIL 93:2001(F)
©
ISO et FIL 2001
FIL 93:2001(F)
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© ISO et FIL 2001
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Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Bruxelles
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.org E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Version française parue en 2007
Publié en Suisse
ii © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés
FIL 93:2001(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Avant-propos. v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions. 1
4 Principe. 1
4.1 Généralités . 1
4.2 Pré-enrichissement dans un milieu liquide non sélectif . 1
4.3 Enrichissement dans des milieux liquides sélectifs. 2
4.4 Étalement sur gélose et caractérisation. 2
4.5 Confirmation. 2
5 Milieux de culture, réactifs et sérums. 2
5.1 Eau. 2
5.2 Milieux de culture. 3
5.3 Réactifs . 10
5.4 Sérums. 13
6 Appareillage et verrerie. 13
7 Échantillonnage . 14
8 Préparation de l’échantillon pour essai. 14
9 Mode opératoire . 14
9.1 Mesures de sécurité . 14
9.2 Prise d’essai et pré-enrichissement . 14
9.3 Enrichissement . 15
9.4 Étalement sur gélose et caractérisation. 15
9.5 Confirmation. 16
10 Cultures de contrôle. 19
11 Expression des résultats . 20
12 Mesures de sécurité . 20
13 Rapport d’essai . 20
Annexe A (normative) Schéma du mode opératoire . 21
Annexe B (normative) Spécification pour le vert brillant. 22
Annexe C (informative) Méthode normalisée d’étalement sur gélose . 23
Bibliographie . 24
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés iii
FIL 93:2001(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 3.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 6785⎪FIL 93 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL). Elle est publiée conjointement
par l'ISO et la FIL.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 6785:1985), qui a fait l’objet d’une
révision technique.
Les Annexes A et B constituent la partie normative de la présente Norme internationale. L’Annexe C est
fournie à titre informatif uniquement.
iv © ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés
FIL 93:2001(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL, auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l’ISO et avec
l’AOAC International pour l’élaboration de méthodes normalisées d’analyse et d’échantillonnage pour le lait et
les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d’Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l’approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux votants.
La Norme internationale ISO 6785|FIL 93 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en
collaboration avec l’AOAC International. Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par
l’AOAC International.
L’ensemble des travaux a été confié à l’Équipe d’Action mixte d’Harmonisation du Comité permanent chargé
des Méthodes microbiologiques d’analyse, sous la conduite de son chef de projet, Monsieur H. Becker (DE).
Cette quatrième édition annule et remplace la troisième édition (FIL 93:1995).
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés v
NORME INTERNATIONALE
FIL 93:2001(F)
Lait et produits laitiers — Recherche de Salmonella spp.
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode pour la recherche de Salmonella spp. dans le lait et
les produits laitiers.
2 Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente Norme internationale. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s'appliquent pas. Toutefois, les parties
prenantes aux accords fondés sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité
d’appliquer les éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non
datées, la dernière édition du document normatif en référence s'applique. Les membres de l’ISO et de la CEI
possèdent le registre des Normes internationales en vigueur.
ISO 8261|FIL 122, Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des échantillons
pour essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
Salmonella
micro-organismes qui forment des colonies typiques sur des milieux solides sélectifs et qui possèdent les
caractéristiques biochimiques et sérologiques décrites lorsque les essais sont exécutés suivant la présente
Norme internationale
3.2
recherche des Salmonella
détermination de la présence ou de l’absence de ces micro-organismes dans une masse ou un volume
déterminé de produit, lorsque les essais sont exécutés selon la présente Norme internationale
4 Principe
4.1 Généralités
La recherche des Salmonella nécessite quatre phases successives (voir Annexe A).
4.2 Pré-enrichissement dans un milieu liquide non sélectif
Ensemencement de la prise d’essai dans le milieu de pré-enrichissement, puis incubation à 37 °C pendant
16 h à 20 h.
© ISO et FIL 2001 – Tous droits réservés 1
FIL 93:2001(F)
4.3 Enrichissement dans des milieux liquides sélectifs
Ensemencement du milieu de Rappaport-Vassiliadis modifié au chlorure de magnésium/vert malachite et du
milieu sélénite/cystine avec la culture obtenue en 4.2.
Incubation du milieu de Rappaport-Vassiliadis modifié au chlorure de magnésium/vert malachite dans un bain
d’eau ou un incubateur (6.4) à 41,5 °C pendant deux périodes successives de 24 h.
Incubation du milieu sélénite/cystine à l’étuve (6.3) à 37 °C pendant deux périodes successives de 24 h.
4.4 Étalement sur gélose et caractérisation
À partir des cultures obtenues (4.3), ensemencement de deux milieux solides sélectifs (gélose au vert brillant
et au rouge de phénol et un autre milieu solide sélectif convenable).
NOTE Des milieux convenables permettent de détecter les souches de Salmonella fermentant le lactose.
Incubation du milieu au vert brillant et au rouge de phénol à l’étuve (6.3) à 37 °C et examen après 20 h à 24 h
et, si nécessaire, après 40 h à 48 h pour contrôler la présence de colonies qui, d’après leurs caractéristiques,
pourraient être des Salmonella.
Incubation du second milieu solide sélectif à température appropriée et examen après une durée appropriée
pour contrôler la présence de colonies qui, d’après leurs caractéristiques, pourraient être des Salmonella.
4.5 Confirmation
Repiquage des colonies présumées de Salmonella (4.4) et confirmation au moyen de tests biochimiques et
sérologiques appropriés.
5 Milieux de culture, réactifs et sérums
Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il est recommandé d’utiliser, pour la préparation des milieux de
culture, des comp
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.