ISO/TS 18867:2015
(Main)Microbiology of the food chain — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — Detection of pathogenic Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis
Microbiology of the food chain — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — Detection of pathogenic Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis
ISO/TS 18867:2015 specifies two horizontal methods for detection of the pathogenic bioserotypes of Y. enterocolitica and one for detection of Y. pseudotuberculosis by using real-time PCR-based methods. The described methods allow for the detection of the two pathogens in enrichments and allow the isolation of colonies. Y. pestis, the causative agent of bubonic and pneumonic plague harbours a variant of the ail gene as well and will be detected by the same primer/probe set as Y. pseudotuberculosis. However, Y. pestis is normally not associated with food. This Technical Specification is applicable to products for human consumption, animal feeding stuffs, and environmental samples.
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection de micro-organismes pathogènes dans les aliments — Détection des Yersinia enterocolitica et Yersinia pseudotuberculosis pathogènes
ISO/TS 18867:2015 décrit deux méthodes horizontales pour la détection de biosérotypes pathogènes des Y. enterocolitica ainsi qu'une méthode pour la détection des Y. pseudotuberculosis en faisant appel à des méthodes basées sur la PCR en temps réel. Les méthodes décrites permettent la détection des deux micro-organismes pathogènes par enrichissement et permettent d'isoler des colonies. Y. pestis, l'agent responsable de la peste bubonique et pneumonique héberge aussi un variant du gène ail et sera détecté par le même ensemble d'amorce et de sonde que Y. pseudotuberculosis. Toutefois, Y. pestis n'est normalement pas associé aux aliments. La présente Spécification technique est applicable aux produits destinés à la consommation humaine, aux aliments pour animaux et aux échantillons environnementaux.
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TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 18867
First edition
2015-09-15
Microbiology of the food chain —
Polymerase chain reaction (PCR)
for the detection of food-borne
pathogens — Detection of pathogenic
Yersinia enterocolitica and Yersinia
pseudotuberculosis
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Réaction de polymérisation
en chaîne (PCR) pour la détection de micro-organismes pathogènes
dans les aliments — Détection des Yersinia enterocolitica et Yersinia
pseudotuberculosis pathogènes
Reference number
©
ISO 2015
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Contents Page
Foreword .v
Introduction .vi
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principles . 1
4.1 General . 1
4.2 Microbial enrichment . 2
4.3 Nucleic acid extraction . 2
4.4 Amplification and detection . 2
4.5 Isolation . 2
5 Reagents . 2
5.1 General . 2
5.2 Culture media . 2
5.2.1 General. 2
5.2.2 Diluent . 2
5.2.3 Enrichment media . 2
5.2.4 Selective solid medium . 4
5.2.5 Potassium hydroxide in saline solution, KOH . 5
5.3 Nucleic acid extraction . 5
5.4 Reagents for PCR . 5
5.5 Primers and probes. 5
6 Apparatus and equipment . 5
6.1 General . 5
6.2 Equipment for sample preparation prior to enrichment . 6
6.3 Equipment for microbial enrichment . . 6
6.4 Equipment for nucleic acid extraction . 6
6.5 Equipment for real-time PCR. 6
7 Sampling . 6
8 Procedure. 6
8.1 Sample preparation prior to enrichment . 6
8.1.1 General. 6
8.1.2 Preparation of the sample . 6
8.2 Microbial enrichment . 7
8.2.1 Pathogenic Y. enterocolitica . 7
8.2.2 Y. pseudotuberculosis . 7
8.2.3 Pathogenic Y. enterocolitica and Y. pseudotuberculosis . 7
8.3 Isolation of colonies, optional . 7
8.3.1 Pathogenic Y. enterocolitica . 7
8.3.2 Y. pseudotuberculosis . 7
8.3.3 Process controls . 8
8.4 Nucleic acid extraction . 8
8.5 PCR amplification . 8
8.5.1 General. 8
8.5.2 PCR controls . . 8
8.6 Confirmation of the PCR product . 8
8.6.1 General. 8
8.6.2 Interpretation of the PCR result . 8
9 Test report . 9
Annex A (normative) PCR detection and isolation of pathogenic Y. enterocolitica (see
Figure A.1) .10
Annex B (informative) Real-time PCR for detection of Y. enterocolitica .11
Annex C (informative) Detection and isolation of Y. pseudotuberculosis .21
Annex D (informative) Simultaneous detection of pathogenic Y. enterocolitica and
Y. pseudotuberculosis using multiplex real-time PCR .26
Bibliography .29
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Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical
Barriers to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is the European Committee for Standardization (CEN)
Technical Committee CEN/TC 275, Food analysis — Horizontal methods, in collaboration with Technical
Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9, Microbiology, in accordance with the
Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
Introduction
Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis are zoonotic bacterial pathogens causing food-
borne infection (yersiniosis) in humans worldwide. The main reservoir for pathogenic Y. enterocolitica
[3]
is domestic pigs and for Y. pseudotuberculosis a wide range of domestic and wild animals such as
[4]
rodents, deer, birds, and various farm animals serve as potential reservoirs. Some of the biotypes of Y.
enterocolitica are associated w
...
SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 18867
Première édition
2015-09-15
Microbiologie de la chaîne
alimentaire — Réaction de
polymérisation en chaîne (PCR) pour
la détection de micro-organismes
pathogènes dans les aliments —
Détection des Yersinia enterocolitica
et Yersinia pseudotuberculosis
pathogènes
Microbiology of the food chain — Polymerase chain reaction (PCR)
for the detection of food-borne pathogens — Detection of
pathogenic Yersinia enterocolitica and Yersinia
pseudotuberculosis
Numéro de référence
©
ISO 2015
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Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principes . 2
4.1 Généralités . 2
4.2 Enrichissement microbien . 2
4.3 Extraction de l’ADN . 2
4.4 Amplification et détection . 2
4.5 Isolement . 2
5 Réactifs . 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Milieux de culture . 2
5.2.1 Généralités . 2
5.2.2 Diluant . 2
5.2.3 Milieux d’enrichissement . 3
5.2.4 Milieux solides sélectifs . 4
5.2.5 Solution d’hydroxyde de potassium en solution saline, KOH . 5
5.3 Extraction de l’ADN . 5
5.4 Réactifs pour la PCR. 5
5.5 Amorces et sondes . 6
6 Appareillage et équipement . 6
6.1 Généralités . 6
6.2 Équipement de préparation des échantillons avant l’enrichissement . 6
6.3 Équipement pour l’enrichissement microbien . 6
6.4 Équipement pour l’extraction de l’ADN . 6
6.5 Équipement pour la PCR en temps réel . 6
7 Échantillonnage . 6
8 Mode opératoire. 6
8.1 Préparation de l’échantillon avant l’enrichissement . 7
8.1.1 Généralités . 7
8.1.2 Préparation de l’échantillon . 7
8.2 Enrichissement microbien . 7
8.2.1 Y. enterocolitica pathogènes . 7
8.2.2 Y. pseudotuberculosis . 7
8.2.3 Y. enterocolitica et Y. pseudotuberculosis pathogènes . 7
8.3 Isolement de colonies, facultatif . 7
8.3.1 Y. enterocolitica pathogènes . 7
8.3.2 Y. pseudotuberculosis . 8
8.3.3 Témoins de processus . 8
8.4 Extraction de l’acide désoxyribonucléique (ADN) . 8
8.5 Amplification PCR. 8
8.5.1 Généralités . 8
8.5.2 Témoins de PCR . 9
8.6 Confirmation du produit PCR . 9
8.6.1 Généralités . 9
8.6.2 Interprétation du résultat de PCR . 9
9 Rapport d’essai . 9
Annexe A (normative) Détection par PCR et isolement des Y. enterocolitica pathogènes
(voir la Figure A.1) .10
Annexe B (informative) PCR en temps réel pour la détection des Y. enterocolitica .11
Annexe C (informative) Détection et isolement des Y. pseudotuberculosis .21
Annexe D (informative) Détection simultanée des Y. enterocolitica et des
Y. pseudotuberculosis pathogènes par PCR multiplex en temps réel .26
Bibliographie .29
iv © ISO 2015 – Tous droits réservés
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer
un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à
l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes
de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —
Informations supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est le CEN/TC 275, Analyse des produits
alimentaires — Méthodes horizontales, du Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec
le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie, conformément à
l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Introduction
Yersinia enterocolitica et Yersinia pseudotuberculosis sont des bactéries pathogènes, agents de zoonoses,
responsables au niveau mondial d’une infection d’origine alimentaire (yersiniose) chez l’homme.
[3]
Les porcs domestiques sont le principal réservoir de Y. enterocolitica pathogènes, tandis que pour
Y. pseudotuberculosis, un large éve
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.